[发明专利]一种以翡翠贻贝粘附蛋白制备生物粘合剂的方法

摘要

一种以翡翠贻贝粘附蛋白制备生物粘合剂的方法，涉及一种生物粘合剂。提供一种从原料来源广泛、价格低廉的翡翠贻贝(P.viridis)中提取粘附蛋白，低成本制备具有良好生物相容性的防水生物粘合剂的方法。从活的翡翠贻贝上切取其足部，切碎匀浆，经蛋白酸化、丙酮沉淀蛋白、纯化等处理后即得。通过从盛产于我国东南沿海的翡翠贻贝中快速获得粘附蛋白防水生物粘合剂。用该方法制备的翡翠贻贝生物粘合剂具有产量高，成本低廉，粘附效果好等特点。所制备的粘合剂能粘附在玻璃、金属钛、塑料表面，能在短时间内粘附细胞，粘接塑料或小鼠股骨，无细胞毒性。作为生物医用材料生物粘合剂在临床使用具有广泛的应用前景。

主权项

1. 一种以翡翠贻贝粘附蛋白制备生物粘合剂的方法，其特征在于所述的以翡翠贻贝粘附蛋白制备生物粘合剂的过程如下：1)取活的翡翠贻贝足部，用-5～0℃的PBS冲洗后，在-5～0℃的含蛋白酶抑制剂的5％醋酸溶液中切碎；2)用分散机/均质器将上述切碎混合液在冰上匀浆；3)将组织匀浆液离心，取上清S1，记录体积V1，弃沉淀；4)将上清S1冰浴，同时缓慢加入60％高氯酸(PCA)至终浓度1％；5)温和搅拌20～40min后离心，回收上清S2，记录体积V2；6)将上清S2在-10～-20℃的冰乙醇中冷却，并在搅拌时加入浓硫酸酸化，至终浓度0.3M；7)向混合液中逐滴加入两倍体积的预冷的-82～-86℃丙酮；8)静置20～30min后离心，弃上清，取沉淀溶于5％乙酸中，再离心，取上清液，冻干；9)用5％冰醋酸溶液重新溶解冻干产物，离心去沉淀，将上清浓度调整到蛋白浓度为1.44mg/ml，即得到一种以翡翠贻贝粘附蛋白制备生物粘合剂。