[发明专利]一种检测土壤中铵氧化酶活性的分析方法

摘要

本发明涉及一种检测土壤中铵氧化酶活性的分析方法：1)称取新鲜土样品n份置于三角瓶中，向其中n－1个三角瓶中加入底物硫酸铵溶液，另1个试管中加入等量的蒸馏水代替底物作为样本对照，然后向所有三角瓶中加入氯酸钠溶液，摇匀，盖好瓶塞后恒温培养；2)培养结束后，加氯化钾溶液，振荡，过滤；3)吸取一定量的滤液于比色试管中，加入氯化铵缓冲溶液和显色剂，混匀，显色；4)用分光光度法在520nm处比色测定吸光度值A；5)根据标准曲线计算亚硝态氮含量，进而计算铵氧化酶活性。本发明优点为：1)简化了操作步骤，减少了实验过程中的不确定性；2)减少对设备要求的依赖性；3)方法准确度高，易操作；4)结果稳定可靠，重现性好。

主权项

1.一种检测土壤中铵氧化酶活性的分析方法，其特征在于：1)称取5-10g新鲜土样品n份分别置入n个三角瓶中，n≥2，向其中n-1个三角瓶中加入5-15mL 1-10mM的底物硫酸铵工作液，另1支试管中加入等量的蒸馏水代替底物作为样本对照，然后向所有三角瓶中加入0.2-0.5mL 1.0-2.0M的氯酸钠溶液(试验中加入的氯酸钠溶液是用来抑制亚硝态氮到硝态氮的氧化)，混匀，盖好瓶塞，放在37±1℃恒温培养中恒温培养2±0.2h；同时作试剂空白对照；2)培养结束后，分别向三角瓶中加入5-20mL 1.8-2moLKCL溶液，混匀，振荡1±0.5h后，过滤；3)分别吸取5-10ml滤液于比色试管中，加入3-5ml 0.19-0.2M氯化铵缓冲溶液和2-5ml显色剂，混匀，显色15±5min；4)用分光光度法520nm处测定吸光度A；5)制作工作标准曲线：配制一系列亚硝态氮标准溶液，分别吸取一系列的标准溶液5-10ml于不同比色试管中，分别加入3-5ml 0.19-0.2M氯化铵缓冲溶液和2-5ml显色剂，混匀，显色15±5min，与样品一起在520nm测定吸光度A’；以亚硝态氮溶液的系列浓度和测定的吸光值A’制作工作标准曲线，得到斜率b；6)根据吸光值A和斜率b，计算所测定滤液中亚硝态氮的浓度S，S＝A*b；7)计算样品中亚硝态氮含量；8)计算铵氧化酶活性：计算公式为：(S-C)*V1*V2/(V3.W)＝μg NO2-N/g干土.2h式中：S为样品测定的平均值(mg NO2-N/L)；C为对照值(mgNO2-N/L)；V1为比色试管中的液体体积(mL)；V2为提取液的体积(mL)；V3 为吸取的滤液体积(mL)；W为干土质量(g)。