[发明专利]一种基于移动切割内切酶的DNA结合蛋白检测方法

摘要

一种基于移动切割内切酶的DNA结合蛋白检测方法针对被测的DNA结合蛋白的识别序列设计一段双链核酸探针，其中一条单链5’端标记一个连接基团1并固定到固相载体表面2，另一条单链5’端标记一个信号分子6；在含有待测蛋白的识别位点3的3’端设计一个IIS型内切酶识别位点5，调节两识别位点的间距，使酶切位点4位于待测蛋白结合位点3之中。操作过程为：I.将可能含有待测DNA结合蛋白的溶液与固定化的双链探针一起孵育，然后在内切酶体系中进行酶切反应；II.当待测蛋白存在时，信号分子保留在载体表面，而无待测蛋白时，探针便被内切酶在空闲的蛋白结合位点中切断；III.根据信号强度实现对待测蛋白的非标记检测。

主权项

1.一种基于移动切割内切酶的DNA结合蛋白检测方法，其特征为：双链寡核苷酸探针的设计：针对待检测的DNA结合蛋白的特异性DNA识别位点的序列信息设计一段双链寡核苷酸探针，其中一条单链5’端标记一个连接基团(1)并固定到固相载体(2)表面，另一条与之互补的单链的5’端引入一个信号分子(6)；同时在含有待测DNA结合蛋白的识别位点(3)的3’端设计一个特异的IIS型限制性内切酶识别位点(5)，调节限制性内切酶与待检测DNA结合蛋白识别位点(3)间的碱基个数，使移动切割限制性内切酶的切割位点(4)位于待检测DNA结合蛋白结合位点(3)之中；其检测方法为：将可能含有待检测的DNA结合蛋白的溶液与固定化的上述双链寡核苷酸探针一起孵育，清洗未结合的溶液后将该固定化的双链寡核苷酸探针在限制性内切酶体系中进行酶切反应，最后检测固相载体表面残留的信号分子的强度实现间接检测溶液中含有的待检测的DNA结合蛋白的量。