[发明专利]一种用枯草芽孢杆菌发酵制备脱苦氨肽酶的方法及应用

摘要

一种用枯草芽孢杆菌发酵制备脱苦氨肽酶的方法及应用，属于酶制剂、食品添加剂技术领域。本发明涉及利用枯草芽孢杆菌Zj016发酵生产，发酵液通过乙醇分级沉淀，获得氨肽酶制品；本发明还涉及这种氨肽酶的应用，这种氨肽酶与碱性蛋白酶协同水解大豆分离蛋白，水解4h水解度(DH)可达25.03％，且水解液无苦味，能很好地解决了用其它酶生产大豆肽易产生苦味的难题。

主权项

1.枯草芽孢杆菌脱苦氨肽酶的制备方法，其特征是：A枯草芽孢杆菌发酵，收集发酵液：(1)出发菌株：采用枯草芽孢杆菌Zj016为出发菌株；(2)发酵培养基组成：玉米淀粉33～42g/L，豆渣粉27～35g/L，KH2PO4·12H2O 0.16～0.32g/L，K2HPO4 2.68～5.0g/L，NaCl 1g/L，MgSO4·7H2O0.1～0.3g/L，0.1mol/L的CoCl2 1～3ml，用氢氧化钠调pH7.5；(3)发酵条件：接种量8％，初始pH7.5～8，35～40℃，200～400rpm，培养15～16h；(4)收集发酵液：将发酵液4℃ 10000rpm离心10min后，弃沉淀，收集上清液；B用乙醇分级沉淀：(1)向收集的上清液中加入-20℃乙醇，使乙醇终浓度为20％进行第一次醇沉，4℃以10000rpm离心10min后，弃沉淀，收集上清液；(2)往第一次醇沉后的上清液中加入-20℃乙醇，使乙醇终浓度为40％进行醇沉，4℃以10000rpm离心10min后，弃上清，取沉淀；(3)沉淀加入少量pH8.5含0.1mmol/LCoCl2的Tris-HCl缓冲液溶解，4℃以10000rpm离心10min后，弃沉淀，收集上清液，即为氨肽酶溶液。