[发明专利]一种检测抗体亲和力的方法

摘要

本发明公开了一种检测抗体亲和力的方法，该检测方法主要包括步骤：(1)抗原包被微球，(2)抗体亲和力的检测和(3)数据处理。所述检测抗体亲和力的方法具有简单快捷、敏感度高、重复性好、检测结果更加稳定可靠等优点。

主权项

1.一种检测抗体亲和力的方法，其特征是，主要包括以下步骤：(1)抗原包被微球：-将50μL的微球活化，活化后的微球离心；-吸弃上清，将微球重悬于pH＝5.0的200-300μL 50mM的MES缓冲液的溶液中，涡漩振荡10-30s，超声振荡10-30s；微球离心；该步骤重复一次；-吸弃上清，将微球重悬于100μL 50mM的MES缓冲液(pH5.0)中，涡漩振荡约10-30s，超声处理约10-30s；-往悬浮的微球中加入0.8-1.2μg抗原，用50mM的MES缓冲液(pH5.0)溶液将总体积补至450-550μL；用涡漩振荡器混匀，室温避光振荡1.5-3hr；-将偶联了抗原后的微球离心；-吸弃上清，将微球重悬于500μL PBS-TBN溶液中，涡漩振荡约20s，超声约20s；室温避光振荡30min；-将偶联了抗原的微球离心，吸弃上清，将微球重悬于0.8-1.2mL PBS-TBN溶液中，涡漩振荡10-30s，超声约10-30s后将微球离心；重复该步骤一次；-吸弃上清，将微球重悬于250-1000μL PBS-TBN溶液中；-包被好的微球通过计数后于2-8℃避光保存；(2)抗体亲和力的检测：-取出微孔滤板，确定和标记位置；将待检测的抗体进行梯度稀释；将不同浓度的抗体，分别对应加入到滤板的微孔中，每孔的量为23-28μl；-抗原包被的微球涡漩振荡，超声处理后稀释至35-45个/μl；-在微孔中分别加入抗原包被的微球25μl，37℃左右震荡孵育25-35min；-抽滤，洗板三至五次；-每孔分别加入45-55μl的2μg/ml藻红蛋白标记的抗抗体，37℃左右避光振荡孵育25-40min；-抽滤，洗板三至五次；-读取荧光值；(3)数据处理。