[发明专利]高密度蛭弧菌游泳体的发酵培养技术

摘要

本发明是指一种高密度蛭弧菌游泳体的发酵培养技术，其技术包括如下步骤：1)将宿主菌摇床培养，离心后加入DNB液后得宿主菌悬浮液；2)在DNB液中加入宿主菌悬浮液，再接入蛭弧菌斑后培养，离心后加入DNB液即得蛭弧菌浓缩液；3)往DNB液中先加入谷氨酸钠，再接入宿主菌悬浮液，最后接入蛭弧菌浓缩液，使其浓度为1～10³PFU/mL，然后置于发酵罐中培养4～6天，即得到密度为10⁸～10¹⁴PFU/mL的蛭弧菌发酵液体，离心浓缩即得蛭弧菌游泳体浓缩液。本发明成本低，蛭弧菌终浓度高，应用范围广，使其不但在水源性、食源性致病菌防治方面，而且在医学、环境污染、农业、工业、军事领域等方面均可使用。

主权项

1.高密度蛭弧菌游泳体的发酵培养技术，其特征在于：该技术的步骤及其工艺条件如下：步骤一：宿主菌悬浮液的制备：将宿主菌接种于常规培养基中，置于20～40℃摇床中培养12～24h，使其处于对数生长期，培养液在2～15℃，5000～8000rpm离心15～40min，保留沉淀弃去上清液，往沉淀中加入与其体积比为0.05～2％稀营养肉汤DNB培养液，即得到浓度达1018～1026CFU/mL的宿主菌悬浮液，然后置于2～15℃冰箱中保存备用；步骤二：蛭弧菌游泳体浓缩液的制备：在稀营养肉汤DNB培养液中先加入步骤一制备的宿主菌悬浮液，使宿主菌在DNB液体中的浓度达1010～1018CFU/mL，再接入用常规方法培养出来的蛭弧菌斑，然后将此培养液在20～40℃培养20～60h，再在2～15℃，5000～8000rpm离心15～40min，保留上清液弃去沉淀，将上清液再在2～15℃，10000～20000rpm离心15～40min，保留沉淀弃去上清液，沉淀为蛭弧菌游泳体，往沉淀中加入与其体积比为0.05～2％DNB培养液，混匀即得到浓度达106～108PFU/mL蛭弧菌游泳体浓缩液，然后将此浓缩液置于2～15℃冰箱保存备用；步骤三：高密度蛭弧菌游泳体的发酵培养工艺：配制大量稀营养肉汤DNB培养液，并加入经纤维素滤膜过滤处理后的谷氨酸钠溶液，使谷氨酸钠溶液在培养液中的浓度达0.05～10mM，再接入步骤一制得的宿主菌悬浮液，使宿主菌起始浓度达1010～1018CFU/mL，然后接入步骤二制备的蛭弧菌游泳体浓缩液，使混合培养液中的蛭弧菌起始浓度达1～103pFU/mL后，装入发酵罐，于20～40℃进行常规发酵培养，培养过程中至少加两次宿主菌，每次间隔18～30h，并保证每次的培养液中宿主菌浓度达1010～1018CFU/mL，发酵培养4～6天后，即可得到浓度达108～1014pFU/mL的蛭弧菌发酵液，最后将此发酵液先在2～15℃，5000～8000rpm离心15～40min，弃去沉淀，保留上清液，上清液再在2～15℃，10000～20000rpm离心15～40min，保留沉淀弃去上清液，往沉淀中加入与其体积比为0.05～2％稀营养肉汤DNB培养液混匀，即得到蛭弧菌游泳体发酵浓缩液。