[发明专利]一种建立大蕉和巴西蕉高效体细胞胚胎发生再生植株的方法

摘要

本发明公开了一种建立大蕉和巴西蕉高效体细胞胚胎发生再生植株的方法。该方法在悬浮细胞体胚诱导前先用不含2，4－D的M2液体培养基预培养7～10天，经筛网过滤筛选出大小及生长状态较一致的细胞团，接种于体胚诱导培养基上。预培养可使体胚诱导率及其后的植株转换率均提高1倍左右；经筛网过滤所得大小范围为154μm～900μm的细胞团其体胚诱导效果最佳；大蕉和巴西蕉细胞的最佳接种量分别为0.4ml 20％SCV和1ml 20％SCV。此外在体胚诱导初期于香蕉现有技术体胚诱导培养基上添加ABA和抗坏血酸，在一定程度上防止了大蕉在体胚诱导期间培养物容易褐化的现象，并可有效提高大蕉和巴西蕉胚性悬浮细胞的体胚发生频率。

主权项

1.一种建立大蕉和巴西蕉高效体细胞胚胎发生再生植株的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)胚性愈伤组织的诱导：分别以大蕉或巴西蕉1～12梳未成熟雄花序为外植体，接种于愈伤组织诱导培养基上诱导出胚性愈伤组织；(2)均一稳定的胚性细胞悬浮系的建立：挑取步骤(1)诱导出的大蕉黄色小颗粒状胚性愈伤组织或巴西蕉浅黄色小颗粒状胚性愈伤组织，分别转入M2液体培养基中，置于90～110rpm摇床上悬浮培养3～4个月即可得分散、均质的大蕉胚性细胞悬浮系或巴西蕉胚性细胞悬浮系；(3)体细胞胚胎的诱导：在体胚诱导前先将上述胚性悬浮细胞转入不含2，4-D的M2液体培养基中预培养7～10天，随后经筛网过滤筛选出大小及生长状态一致的细胞团，从细胞团中吸取0.2～2ml 20％SCV即细胞接种量接种于含1mg·L-1ABA和5mg·L-1抗坏血酸的体胚诱导培养基中，置于28±1℃黑暗中进行体细胞胚胎的诱导；将诱导出的白色球形胚转入去除ABA和抗坏血酸的体胚诱导培养基中继续培养直至体胚发育成熟，得到成熟体胚；(4)体胚的萌发及其植株再生：将步骤(3)诱导出的成熟体胚转入体胚萌发培养基中；置于28±1℃黑暗培养，待叶鞘抽出后，将其转至MR生根壮苗培养基中继续培养，进一步发育成健壮的香蕉小植株。