[发明专利]一种DNA的多点定向突变方法无效
| 申请号： | 200710052273.0 | 申请日： | 2007-05-25 |
| 公开（公告）号： | CN101096669A | 公开（公告）日： | 2008-01-02 |
| 发明（设计）人： | 廖玉才;李和平;刘春雷;黄涛 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 430070湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种DNA的多点定向突变方法。本发明利用单向PCR反应，特异扩增突变序列，增加突变模板量；再结合重叠延伸PCR，获得定向多点高频率DNA突变；在这一反应体系中，改变引物设计方法，使之既利于与模板复性，又利于片段间的重叠延伸，从而提高突变频率。本发明为体外定向诱变DNA提供了一种简单有效的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 dna 多点 定向 突变 方法 | ||
【主权项】：
1、一种DNA分子多点定向突变的方法，包括重叠延伸PCR步骤，其特征在于，在所述的重叠延伸PCR之前增加一个单向PCR步骤：即在期望的基因突变位点处设计一对特异引物，每一条特异引物先进行单向PCR，按照编号为P1与P4，P3与P6，P5与P8，P7与P2的组合将单向PCR产物合并后，进行第一轮PCR，产物为含有不同突变位点的DNA片段；以第一轮PCR产物为模板，进行第二轮PCR；再以第二轮PCR产物为模板，进行第三轮PCR，得到全长基因序列。
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