[发明专利]狂犬病毒套式RT－PCR检测方法及检测试剂盒

摘要

本发明旨在提供一种狂犬病毒套式RT－PCR检测方法及检测试剂盒。该试剂盒由总RNA提取板块、RT板块和PCR板块三个部分组成，包括总RNA提取试剂、RNA洗液，反转录预混体系、外套PCR预混体系、内套PCR预混体系以及RT反应对照样品和PCR对照样品。其特征是利用套式RT－PCR技术，根据RV流行毒株序列特点设计的特异性简并引物，制定了样品处理的程序并优化了检测步骤，可以完成全部7个基因型RV的检测。本发明具有灵敏度高、特异性强，操作步骤简便、快捷，检测结果可信的特点，获得的序列信息直接用于流行毒株遗传衍化关系分析，适用于狂犬病的病原学诊断和流行病学研究。

主权项

1.一种狂犬病毒套式RT-PCR检测方法，其特征是：将RT-PCR检测的样品进行预处理后，提取总RNA，并以狂犬病病毒ERA株的细胞培养物作为RT阳性对照样品，未接毒细胞培养物作为阴性对照样品，与待检样品同时进行总RNA的提取操作；通过套式RT-PCR反应获得特异性扩增产物，将狂犬病毒SRV9细胞毒的总RNA的反转录产物作为PCR阳性对照样品，样品稀释液作为阴性对照样品，与待检样品cDNA同时进行套式PCR操作；取扩增产物琼脂糖凝胶电泳鉴定，当RT阳性、PCR阳性对照呈扩增阳性，RT阴性、PCR阴性对照呈扩增阴性时，判定检测反应成立；此时，若检测样品在与阳性扩增带分子量大小一致的位置出现特异性扩增条带，则判定为检测阳性，否则判定为阴性。