[发明专利]一种酶法制备15NL－苯丙氨酸的方法

摘要

本发明的目的是提供一种酶法制备¹⁵NL－苯丙氨酸的方法。通过苯丙氨酸解氨酶酶促转化¹⁵N－硫酸铵与反式肉桂酸生成¹⁵NL－苯丙氨酸。本发明的方法合成工艺简单，产量较高，与有机合成法以及酶法比较，N同位素替代容易，产品的纯度可以达到99％，收率71％，同位素丰度大于98％，¹⁵N回收率达88％，适合大规模生产。

主权项

1. 一种酶法制备15NL-苯丙氨酸的方法，通过发酵获得含苯丙氨酸解氨酶的菌体，以15N-硫酸铵为标记氮源，与反式肉桂酸发生酶促反应，经分离纯化获得15NL-苯丙氨酸，未转化的标记氮源进行回收；具体步骤和方法为：A菌体的发酵培养将含苯丙氨酸解氨酶的酵母菌株，25-30℃下固体培养基中培养20-30小时，然后置于种子培养基中，25-30℃下培养20-24小时，移至产酶培养基中，25-30℃下培养21-24小时，离心并用生理盐水洗涤，获得含苯丙氨酸解氨酶的菌体；B转化反应将步骤A获得的含苯丙氨酸解氨酶的菌体置于转化反应液中，加入的量使反式肉桂酸与含苯丙氨酸解氨酶菌体的质量比为1∶2.5-4.0，所说的转化反应液为含15N-硫酸铵0.5-0.6mol/l、氢氧化钠1.0-1.2mol/l、反式肉桂酸质量百分含量为1.0-2.0％的溶液，25-30℃下转化反应20-24小时；C分离纯化将步骤B获得的转化产物混合物离心除菌后，用稀硫酸调pH至3.0-4.0，离心除沉淀，再用氢氧化钠溶液调pH至5.5-6.5，经大孔吸附树脂分离，去离子水洗脱，洗脱液用稀硫酸调pH至5.5，经旋转蒸发后，加入无水乙醇，冷却结晶，再经过滤，将晶体冷冻干燥获得15NL-苯丙氨酸；D氮源回收将步骤C大孔吸附树脂分离后的含15N-硫酸铵的混合溶液，与氢氧化钠溶液反应，放出的氨气用硫酸溶液收集，经蒸发和烘干获得高纯度的15N-硫酸铵。