[发明专利]一种生物催化制备(R)－2－羟基－4－苯基丁酸乙酯的方法

摘要

一种生物催化制备(R)－2－羟基－4－苯基丁酸乙酯的方法，属于生物催化不对称还原制备医药手性中间体技术领域。本发明利用筛选的高对映体选择性羰基还原酶的产生菌博伊丁假丝酵母(Candida boidinii)等，在优化条件下发酵产酶，湿菌体在单一水相体系、水/有机两相体系或水/树脂两相体系中，以2－羰基－4－苯基丁酸乙酯为底物，并添加葡萄糖，制备(R)－2－羟基－4－苯基丁酸乙酯。当底物2－羰基－4－苯基丁酸乙酯浓度为1～50g/L，转化1h～48h，得到产物(R)－2－羟基－4－苯基丁酸乙酯的对映体过量值达84.9～98.88％，摩尔转化率达72.0～84.6％，在整个反应过程中不需要添加辅酶。

主权项

1.一种以2-羰基-4-苯基丁酸乙酯为底物生物催化制备(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯的方法，该方法包括步骤：(1)选择以下的选择性羰基还原酶产生菌菌株作为出发菌株：粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)AS 1.1799，博伊丁假丝酵母(Candida boidinii) AS2.2159、AS 2.2160或AS 2.2162，或赭色掷孢酵母(Sporobolomycessalmonicolor)AS 2.2110、AS 2.2111、AS 2.2113、AS 2.2114、AS 2.2115、AS 2.2116、AS 2.2117、AS 2.2118、AS 2.2119、AS 2.2120、AS2.2121、或AS2.2122；(2)湿菌体的培养：培养基组成以g/L计为：蛋白胨10～30，葡萄糖10～30，酵母膏5～20，pH5.5～7.5，温度20～40℃，将步骤(1)所述菌株培养1～5天，发酵液过滤获得湿菌体作为酶源；(3)配制反应体系：以2-羰基-4-苯基丁酸乙酯为底物，用0.1M、pH5.5～pH7.5的磷酸盐缓冲液配制成单一水相反应体系，底物浓度为1g/L～50g/L；或者用有机溶剂与pH6.5的磷酸盐缓冲液配制成水/有机溶剂两相体系，再加入底物，底物浓度1g/L～50g/L；或者用大孔树脂与pH5.5～pH7.5的磷酸盐缓冲液配制成水/树脂两相体系，再加入底物，底物浓度1g/L～50g/L；(4)酶转化反应：在反应体系中加入步骤(2)所述湿菌体，于20～50℃进行酶反应，反应时间为1～48小时；(5)转化液后处理：转化液过滤或离心分离菌体，清液以乙酸乙酯萃取，吸附树脂用乙酸乙酯洗脱，合并萃取液和洗脱液，再干燥脱水，蒸发回收溶剂，得到无色油状液体(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯。