[发明专利]一种HPV L1蛋白原核表达的高密度发酵方法

摘要

本发明提供了一种HPV L1蛋白原核表达的高密度发酵方法及改良的培养基，还提供了一株高效表达HPV L1蛋白的工程菌。本发明所述的改良培养基能充分满足工程菌在发酵过程中的营养要求，本发明还有效控制了发酵过程中的关键参数。采用本发明所述的发酵方法，不仅将表达质粒的保有率从50％－60％提高到了90％以上，还使得HPV L1蛋白的单位产量提高为改良前的3－4倍，并有效降低了生产成本，对大规模工业生产具有重大意义。

主权项

1.一种HPV L1蛋白原核表达的高密度发酵方法，其特征在于它包括如下步骤：(1)种子活化：将表达HPV L1蛋白的工程菌株大肠杆菌(Escherichiacoli)CGMCC1944在固体2YT培养基上活化，然后挑单菌落到10ml YTL液体培养基上，在25-37℃下培养24-36小时；再将得到的种子液按体积比5％的接种量接种至YTL培养基中，在30-37℃下培养8-12小时；(2)接种：向发酵罐中填充YTL培养基，然后按体积比5％-10％的接种量将上述活化好的种子液接种至液体YTL培养基；(3)发酵：向发酵罐中通入空气或者空气/氧气的混合气，通气量4-8L/min；发酵温度25-37℃，搅拌转数200-800rpm，溶氧控制在30％-100％，pH控制在6.2-7.8，发酵时间20-30小时；当OD600nm＝2-4时开始补料，补料的流加速度是25-400ml/h。(4)诱导HPV L1蛋白的表达，并进行蛋白纯化，得到目的蛋白。