[发明专利]创伤弧菌的一管法半巢式PCR检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明提供了一种可快速检测创伤弧菌的一管法半巢式PCR检测试剂盒及检测方法。试剂盒包括：(1)DNA提取试剂：含缓冲试剂A和细胞裂解试剂B；(2)聚合酶链式反应试剂：包括反应预混试剂C和反应引物试剂D和E，试剂D中的特异引物Vvg1为5′－CATCGTGGTGGTCATACTCATAGC－3′，Vvg2为5′－GGTGCTCGGCTAAGAAGTCGTT－3′，试剂E中的特异引物Vvg3为5′－AAGACGGGATTGCGGTTGAAGT－3′；(3)电泳和显色试剂，包括试剂F、试剂G、试剂H和试剂I。检测方法包括：(1)样品处理；(2)DNA提取；(3)聚合酶链式反应扩增；(4)电泳和显色检测。本发明的优点是检测速度快，特异性强、灵敏度高。

主权项

1、一种一管法半巢式PCR检测试剂盒，包括：(1)DNA提取试剂：含缓冲试剂A和细胞裂解试剂B；试剂A含有NaCl 200～350mmol/L，三羟甲基氨基甲烷50～100mmol/L(ph＝8.0)，乙二胺四乙酸二钠50～100mmol/L；试剂B含有浓度为5～10％的十二烷基磺酸钠水溶液；(2)聚合酶链式反应试剂：包括反应预混试剂C和反应引物试剂D和E； 试剂C包括10×反应缓冲液5μL、500～1000μmol L-1的dNTPs(四种脱氧核苷酸等浓度的混合物)、1～5mmol L-1的MgCl2，1～2个单位的热聚合酶和适量的灭菌超纯水；试剂D包括引物Vvg1和Vvg2，浓度均为5～20μmol L-1，Vvg1特指(5’-CATCGTGGTGGTCATACTCATAGC-3’)；Vvg2特指(5’-GGTGCTCGGCTAAGAAGTCGTT-3’)；试剂E包括引物Vvg3，其浓度为10～30μmol L-1，Vvg3特指(5’-AAGACGGGATTGCGGTTGAAGT-3’)；(3)电泳和显色试剂，包括试剂F、试剂G、试剂H和试剂I；试剂F：为20-50倍电泳缓冲液，含三羟基甲基氨基甲烷--醋酸和乙二胺四乙酸二钠，浓度分别为0.01～0.04mol/L和0.001mol/L；试剂G：含0.1～0.5g琼脂糖；试剂H：Nucleic acid ClearDNA stain试剂I：标准分子量DL2000。