[发明专利]一种将七叶苷用于高产β－葡萄糖苷酶产生菌的平板筛选的方法

摘要

本发明公开了一种将七叶苷用于高产β－葡萄糖苷酶产生菌的平板筛选的方法。包括(1)土样采集，(2)富集培养，(3)七叶苷平板制备，(4)七叶苷平板初筛，(5)分离纯种，(6)摇瓶复筛等步骤。本发明方法能够从富含纤维素资源的样品中快速筛选出具有β－葡萄糖苷酶的活力的菌株，与已经发表的文献中所报导的以纤维二糖平板进行筛选的方法相比，具有明显的价格优势，在同样筛选获得100个菌株的情况下，本发明所述七叶苷法的花费只是纤维二糖平板法的十分之一，并且还具操作简单、结果可信等诸多优点。

主权项

1.一种将七叶苷用于高产β-葡萄糖苷酶产生菌的平板筛选的方法，步骤是从富含纤维素资源的地点采集土样或挑选市售的微生物菌种，进行富集培养，将七叶苷加入基本无机盐培养基中制备平板并以其对富集液微生物进行初筛，以平板背面观菌落周围的培养基颜色变为黑色为指标选取目的菌株再进行摇瓶发酵复筛，通过DNS或Somogyi方法检测酶活性，筛选得到高产β-葡萄糖苷酶的微生物菌株；其特征在于：所述富集培养是以微晶纤维素或滤纸作为唯一碳源，在20～50℃、转速160～250r/min的条件下摇床培养12～72小时；所述对富集液微生物进行初筛的方法是将富集液进行10-1～10-7的梯度稀释，然后分别吸取0.1～0.3mL的稀释液均匀涂布到加入了质量体积百分比为0.01～3％七叶苷的基本无机盐培养基的平板上，在20～50℃下，培养12～72小时；所述选取目的菌株摇瓶发酵复筛的方法是挑取以平板背面观菌落周围的培养基颜色变为黑色的菌落接于产酶培养基中，在温度25～45℃、转速150～250r/min的条件下摇床培养1～7天，然后测酶活。