[发明专利]耶尔森氏菌快速检测试剂盒的制备和使用方法

摘要

本发明涉及一种耶尔森氏菌快速检测试剂盒的制备和使用方法。其中试剂盒内包括环介导等温扩增反应液A、BstDNA聚合酶B、显色剂C；反应液A含有反应缓冲液、dNTP、硫酸镁、上游内引物5－CCGGTTTGATCGGTTTCGCCCACTTACAAGATGGGTGTGCC－3、下游内引物5－GTGCGTTTCTGGCCGAGCTTGCAGACGTTTTGCCAGGATT－3、上游外引物5－CGCCGTGAAGGTAAAGTTCA－3、下游外引物5－CAGAGTTCAGGAACGACAGC－3和甜菜碱；检测耶尔森氏菌的方法包括待测样品或者细菌DNA的提取、耶尔森氏菌的环介导等温扩增反应和显色检测。本发明的优点是快速、特异性强、灵敏度高而且成本低。

主权项

1.一种耶尔森氏菌快速检测试剂盒，其特征是其中的试剂包括：(1)环介导等温扩增反应液A：包括10×Thermopol反应缓冲液、300-500μmol/L dNTP、2-4mmol/L硫酸镁、0.8-1.2μmol/L上游内引物、0.8-1.2μmol/L下游内引物、0.2-0.3μmol/L上游外引物、0.2-0.3μmol/L下游外引物和1-1.5mol/L甜菜碱；其中10×Thermopol反应缓冲液含有200mmol/L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷-盐酸、100mmol/L氯化钾、100mmol/L硫酸铵、20mmol/L硫酸镁和1％曲拉通X-100；其中所述的上游内引物5-CCGGTTTGATCGGTTTCGCCCACTTACAAGATGGGTGTGCC-3、下游内引物5-GTGCGTTTCTGGCCGAGCTTGCAGACGTTTTGCCAGGATT-3、上游外引物5-CGCCGTGAAGGTAAAGTTCA-3、下游外引物5-CAGAGTTCAGGAACGACAGC-3(2)UNG酶：1U/μL；(3)Bst DNA聚合酶B：8U/μL；(4)显色剂C：为10％的荧光染料SYBR GREEN I或者DNAGreen。