[发明专利]检测中期因子浓度的ELISA试剂盒及其使用方法

摘要

检测中期因子浓度的ELISA试剂盒及其使用方法。试剂盒包括：包被到酶标板上的鼠抗人MK单克隆抗体；兔抗人MK多克隆抗体；辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔IgG多克隆抗体；大肠杆菌E.coli中原核表达并通过亲和纯化的His－MK，N端带有6个His标签。其使用包括：用商品化的鼠抗人中期因子单克隆抗体包被酶标板，封闭后加入待检样品、兔抗人中期因子多抗与HRP标记的羊抗兔IgG二抗共孵育；经过彻底洗涤后加入底物TMB溶液反应显色，最后用硫酸终止反应并在450nm处检测吸光度值。通过标准样品的浓度和相应的吸光值绘制标准曲线，待检样品中中期因子的浓度就可以通过它的吸光值并对应标准曲线得到。

主权项

1.检测中期因子浓度的ELISA试剂盒，其特征在于包括以下组成：(1)包被缓冲液为磷酸盐缓冲液(PBS)，其成分为140mM NaCl，2.7mM KCl，10mMNa2HPO4，1.8mM KH2PO4，pH值为7.4；(2)洗涤液为含1％Tween-20的PBS，其成分为PBS，1％Tween-20；(3)封闭液为含1％BSA的PBS，其成分为PBS，1％BSA；(4)加样缓冲液的成分为50mM Tris-HCl，0.5 M KCl，1％BSA，0.05％Tween-20，pH值为8.4；(5)反应终止液成分为2 M H2SO4；(6)包被到酶标板上的鼠抗人MK单克隆抗体母液，浓度为0.5mg/ml；(7)兔抗人MK多克隆抗体母液，浓度为1mg/ml；(8)辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔IgG多克隆抗体母液，浓度为0.5mg/ml；(9)大肠杆菌E.coli中原核表达并通过亲和纯化的His-MK，N端带有6个His标签，其母液浓度为400ng/ml。