[发明专利]一种ZP120的固相合成方法

摘要

本发明提供了一种ZP120：Ac-Arg-Tyr-Tyr-Arg-Trp-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-NH2的固相合成方法，所述方法是以Fmoc-Rink Amide-MBHA树脂为原料，进行程序反应，依次连接氨基保护基，再经脱保护基、酸化、脱切侧链保护基和树脂，得到ZP120的盐，进一步可得到ZP120。本发明有益效果主要体现在(1)采用Fmoc Rink Amide-MBHA树脂作为固相合成载体，成本低；(2)以N，N-二异丙基碳二亚胺作为肽合成缩合剂，产品过程消旋化低，产品质量好、收率高；(3)采用三氟乙酸切割ZP120肽树脂，切割完毕后直接得到肽酰胺的形式，后续处理简单；(4)工艺简单，程序化，利于工业化生产。

主权项

1、一种ZP 120：Ac-Arg-Tyr-Tyr-Arg-Trp-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-NH2的固相合成方法，其特征在于所述方法包括如下顺序步骤：(1)以Fmoc-Rink Amide-MBHA树脂为原料，进行程序反应，依次连接以下保护基：Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，得到Fmoc-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-NH-Rink Amide MBHA树脂；所述程序反应步骤为：先用20％的哌啶/DMF溶液室温处理脱去Fmoc-保护基；再加入1～5当量的Fmoc-保护氨基酸、1～5当量的HOBt和1～5当量的N，N-二异丙基碳二亚胺，搅拌，室温反应2～5小时，连接Fmoc-保护氨基酸；所述HOBt用二氯甲烷或二氯甲烷与N，N-二甲基甲酰胺的混合溶液溶解后加入；(2)用20％的哌啶/DMF溶液室温处理，脱Fmoc-保护后得到H2N-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-NH-Rink Amide MBHA树脂；(3)加入乙酸酐/DMF溶液酸化，得到Ac-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-NH-Rink Amide MBHA树脂；(4)用试剂K脱切侧链保护基和树脂，得到ZP120的TFA盐粗品；所述试剂K体积配比如下：TFA∶thioanisole∶H2O∶phenol∶1，2-ethanethiol＝82.5∶5∶5∶5∶2.5；(5)ZP120的TFA盐粗品用5％醋酸溶液溶解，过滤，滤液经C18键合硅胶装填的反相高效液相色谱柱纯化，水/乙腈梯度洗脱后冷冻干燥，得到ZP120的TFA盐；(6)将ZP120的TFA盐用强碱型阴离子交换树脂脱去三氟醋酸根离子，冷冻干燥得到ZP120。