[发明专利]一种纤维蛋白溶解酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种纤维蛋白溶解酶的制备方法。利用纤维蛋白溶解酶菌株——芽孢杆菌来生产纤维蛋白溶解酶，其通过细菌进行液体发酵生产成本低，可行性强，可用于大规模生产，直接制成胶囊、冲剂、口服液或口服含片，或作为功能性食品配料用于保健食品或普通食品中。本发明改进了以往的纤溶酶产生菌的筛选方法，采用液体培养基富集培养、以纤维蛋白为主要基质的平板初筛和摇瓶复筛的筛选方法，同时进行纤溶活性测定，得到发酵液的酶活为588.4u/ml以上。

主权项

1、一种纤维蛋白溶解酶的制备方法，其特征在于：菌株：芽孢杆菌种子培养：种子培养基以g/100ml计为：蛋白胨1，葡萄糖1，酵母膏0.5，Na2HPO4 12H2O 1.2，MgSO4 7H2O 0.03，调Ph7.2，121℃灭菌20min，培养条件为：摇床转速180rpm，培养温度37℃，培养时间16～18小时；液体发酵培养：液体发酵培养基以g/100ml计为：蛋白胨1～2.5，葡萄糖1～2.5，Na2HPO4 12H2O 1～2.5，NaH2PO4 2H2O 0.13，MgSO4 7H2O 0.1，消泡剂聚氧乙烯氧丙烯甘三油0.03，121℃灭菌20min，调pH7.2；种子培养基按体积百分5％接入装液量为15升液体发酵培养基的25升发酵罐中，培养条件为：搅拌速度180rpm，控制通风量：0～12小时为9L/min，12～24小时为10.5L/min，24～36小时为12L/min；控制培养温度为35～40℃，培养时间35～40小时。酒精沉淀：把发酵液搅拌加到预冷至5～10℃乙醇中，并使乙醇浓度达60～70％，于0~5℃静置沉淀18～24小时，去除上层醇液，下层沉淀即为纤维蛋白溶解酶。冷冻干燥：将沉淀灌袋吊滤，直至滤去大部分乙醇，再进行压榨，然后在40℃下鼓风干燥后冷冻保存。