[发明专利]一种黑色素瘤体外模型的制作方法

摘要

本发明提供了一种黑色素瘤体外模型的制作方法，包括瘤细胞的培养、基质材料的制备和瘤细胞的接种步骤。该方法使用健康成人皮肤制备接种黑色素瘤细胞的基质材料，将皮肤的真皮组织在液氮中连续冻溶，可以有效的杀死真皮中的细胞成分，使用本发明方法制备的基质材料可以真实地反应人类机体的微环境。瘤细胞在接种后，通过空气－液面孵育、液下培养和空气－液面培养相联合的方式，使黑色素瘤细胞容易粘着并种植于HDED表面，进而构建了更为贴近人类机体微环境的黑色素瘤的体外模型。

主权项

1.一种黑色素瘤体外模型的制作方法，其特征在于：取健康成人皮肤标本，用PBS清洗标本表面附着物，常规消毒，去除标本皮下脂肪组织层，制成1×1cm2的皮片，浸于56℃PBS中30分钟，然后去除标本表皮，将去除表皮的标本置于聚乙烯塑料瓶中，将塑料瓶密封后迅速置入液氮中5分钟，取出后室温放置30分钟，依此连续10个循环后，即得HDED基质材料，将基质材料置于经灭菌处理过的六孔板上，1mL/孔加入以DMEM∶F12为3∶1的体积比配制的完全培养基，完全培养基的pH为6.8～7.0，将浓度为1.5×103个/mL的黑色素瘤细胞悬液以0.3mL/块的量接种于HDED表面，置于37℃、5％CO2环境中孵育3小时，然后每孔加入等量完全培养基，以浸没HDED为准，置于37℃、5％CO2环境中培养72小时后，调整完全培养基的量，使黑色素瘤细胞在接触空气的液面状况下生长，37℃、5％CO2环境中继续培养13天，每3～5天换液一次，即得黑色素瘤体外模型。