[发明专利]检测核酸的系统和方法

摘要

本发明描述了检测样品中靶核酸的方法和试剂盒。待分析的样品可以包括与靶核酸的至少一部分杂交的引物、具有与靶核酸的至少一部分杂交的第一区域和具有可检测标记的第二区域的探针、延伸杂交的引物的聚合酶以及包含能切割杂交的杂交探针由此产生标记的探针片段的核酸外切酶活性的酶。杂交探针的至少一部分与其另一部分杂交由此形成折叠结构。该方法包括解链样品、降低样品的温度以便使引物和探针与样品中单链靶核酸的至少一部分各自杂交、延长引物以及释放标记的探针片段。可将样品与包含与标记的探针片段杂交的表面结合捕获探针的固相支持体接触。随后检测标记。

主权项

检测样品中靶核酸的方法，所述方法包括：通过将所述样品加热至第一温度，使所述样品解链，其中所述样品包含：与所述靶核酸的至少一部分杂交的引物；包含第一和第二区域的杂交探针，其中所述第一区域与所述靶核酸的至少一部分杂交，且所述第二区域不与所述靶核酸杂交，且其中所述第二区域包含可检测标记；和聚合酶和具有核酸外切酶活性的酶，其中所述聚合酶在杂交的探针的方向上延伸杂交的引物，且所述酶的核酸外切酶活性切割所述杂交的探针，由此释放包含所述探针第二区域和所述可检测标记的探针片段；和其中所述第一温度高于所述引物和存在于所述样品中的双链核酸的Tm；随后，通过将温度降低至低于所述第一温度的第二温度，使所述样品退火，以便使所述引物和所述杂交探针与所述样品中的靶核酸的单链部分各自杂交；和随后通过使所述聚合酶在第三温度下延伸与所述靶核酸杂交的引物，延长所述引物；使所述酶的核酸外切酶活性切割所述杂交探针，由此释放所述探针片段；任选地重复解链、退火和延长至少一次；将所述样品与固相支持体的表面接触，其中所述固相支持体的表面包含一个或多个与所述探针片段的第二区域的至少一部分杂交的捕获探针；使所述捕获探针在第四温度下与存在于所述样品中的所探针片段的至少一部分杂交，其中所述第四温度低于所述第二和第三温度；以及检测所述固相支持体表面上的标记；其中所述杂交探针的至少一部分与所述杂交探针的另一部分杂交，由此形成折叠结构，且其中所述折叠结构的解链温度(Tm)低于所述第三温度且高于所述第四温度。