[发明专利]一种通用的整合型细胞永生化载体的制备方法无效
| 申请号： | 200810013643.4 | 申请日： | 2008-01-14 |
| 公开（公告）号： | CN101215577A | 公开（公告）日： | 2008-07-09 |
| 发明（设计）人： | 胡国斌;王丹;宋珊珊;王锡亮 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/37;C12N7/01 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 266100山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种通用的整合型细胞永生化载体的制备方法。首先，通过DNA重组技术将具有广谱转化效应的细胞永生化基因——猿猴病毒40大T抗原(SV40T)基因定向插入逆转录病毒载体中，构建重组表达载体；然后，将重组载体与包装质粒pVSV－G共转染GP－293细胞，制备携带SV40T基因的重组泛嗜性逆转录病毒颗粒；所获得的重组泛嗜性逆转录病毒即为通用的整合型细胞永生化载体。该永生化载体能进入所有类型的动物细胞，并将所携带的SV40T基因整合到处于分裂期的靶细胞的基因组中，使其得到可遗传的、稳定的表达，从而保证了靶细胞的高效永生化转化。本发明为各种动物细胞的转基因永生化建系研究提供了一种有效的手段。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 通用 整合 细胞 永生 载体 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种通用的整合型细胞永生化载体的制备方法，其步骤包括：(1)以猿猴病毒40基因组或携带有SV40大T抗原基因的质粒为模板，PCR扩增SV40T基因，SV40T基因序列如序列表中SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示；(2)通过DNA重组技术将SV40T基因定向插入逆转录病毒载体的多克隆位点，构建携带SV40T基因的重组逆转录病毒载体；(3)将步骤(2)得到的重组载体与包装质粒pVSV-G共转染GP-293细胞，培养48-72小时后收获含有重组病毒颗粒的细胞上清液。
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