[发明专利]一种快速大量制备高纯度异藻蓝蛋白的方法

摘要

一种快速大量制备高纯度异藻蓝蛋白的方法，属于蓝藻分离纯化技术领域。本发明利用冻溶和低离子强度溶涨快速提取异藻蓝蛋白，经硫酸铵分级沉淀、羟基磷灰石吸附富集异藻蓝蛋白，并通过羟基磷灰石层析大量制备得到较纯的异藻蓝蛋白，最后利用离子交换层析技术，得到高纯度的异藻蓝蛋白。本方法省去了传统的应用分子筛层析结合羟基磷灰石层析共三步层析的复杂分离纯化程序，克服了难于规模化快速大量制备的难题，大大降低了APC的制备成本，从而为将APC应用于超灵敏的生物医学检测奠定了基础。

主权项

1.一种快速大量制备高纯度异藻蓝蛋白的方法，步骤如下：(1)异藻蓝蛋白的提取将蓝藻用冻溶和低离子强度溶涨的方法解体溶解，离心分离，取上清液，即得异藻蓝蛋白浆液；(2)异藻蓝蛋白的初步纯化用硫酸铵沉淀法，将异藻蓝蛋白从异藻蓝蛋白浆液中沉淀出来，离心收集沉淀，再用pH6.8～7.0的20mM磷酸缓冲液，溶解并透析，除去硫酸铵，得异藻蓝蛋白粗提液；(3)羟基磷灰石层析提取异藻蓝蛋白使用羟基磷灰石在异藻蓝蛋白粗提液中吸附富集异藻蓝蛋白，然后用磷酸缓冲液进行洗脱，得异藻蓝蛋白溶液；(4)离子交换制备高纯度异藻蓝蛋白。