[发明专利]从鱼类肠系膜脂肪组织中克隆鱼类ob基因的方法无效
| 申请号： | 200810023716.8 | 申请日： | 2008-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN101280302A | 公开（公告）日： | 2008-10-08 |
| 发明（设计）人： | 潘庭双;龙良启;王永杰;戴汉川;侯冠军 | 申请（专利权）人： | 安徽省农业科学院水产研究所 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 合肥金安专利事务所 | 代理人： | 金惠贞 |
| 地址： | 230031*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明涉及从鱼类肠系膜脂肪组织中克隆鱼类ob基因的方法。解决了采用现有克隆技术较难克隆出鱼类ob基因的问题。本发明方法全新设计一对引物P1、P2，结构如下：P1：GAGGAATTCGTGCCTATCCAGGAT GAATTC为EcoRI酶切位点，P2：GACAAGCTTCTCAGCATTAGGGCG AAGCTT为HindIII酶切位点，从鱼类的肠系膜脂肪组织RNA中扩增出了不同鱼的ob基因片断，并将ob基因分别克隆至pMD18－T载体中，经酶切鉴定和聚合酶链反应(PCR)鉴定后，进行序列测定，达到能够高效克隆出鱼类ob基因的目的。本发明每个引物含有一个特异性酶切位点，特异性酶切位点的存在为酶切签定和定向克隆提供有利条件。 | ||
| 搜索关键词： | 鱼类 肠系膜 脂肪 组织 克隆 ob 基因 方法 | ||
【主权项】：
1、从鱼类肠系膜脂肪组织中克隆鱼类ob基因的方法，首先提取鱼类的肠系膜脂肪组织总核糖核酸，其特征在于：(1)、取鱼肠系膜脂肪组织总核糖核酸，采用一步法逆转录-聚合酶链反应，用一对特异性引物P1、P2，所述特异性引物P1、P2结构如下：P1：GAGGAATTCGTGCCTATCCAGGAT GAATTC为EcoRI酶切位点，P2：GACAAGCTTCTCAGCATTAGGGCG AAGCTT为HindIII酶切位点，从鱼肠系膜脂肪组织总核糖核酸中扩增取得此鱼ob基因片段；(2)并将此ob基因片段克隆至pMD18-T载体中，经酶切鉴定和聚合酶链反应鉴定后，进行序列测定，获得克隆的鱼类ob基因。
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