[发明专利]一种分支杆菌差异表达系统及其制备方法与应用无效
| 申请号： | 200810033549.5 | 申请日： | 2008-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN101503702A | 公开（公告）日： | 2009-08-12 |
| 发明（设计）人： | 范小勇;赵国屏 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N15/31;A61K39/04;A61P31/06 |
| 代理公司： | 上海正旦专利代理有限公司 | 代理人： | 包兆宜 |
| 地址： | 20043*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属微生物和生物工程领域。涉及一种分支杆菌差异表达系统及其制备方法。本发明采用结核杆菌furA基因启动子/操纵子序列(pfurA)及其突变体为启动子构建分支杆菌差异表达的载体系统——pMFA系列，利用BCG为宿主菌差异表达结核杆菌主要保护性抗原。试验结果表明，用pMFA系列，嵌合蛋白Ag856A2在耻垢分支杆菌及BCG中能在不同pfurA启动子系列驱动下差异表达，具有起始密码子及AT富集区联合突变的pfurAma导致最高水平的基因表达。本发明——pMFA系列，能使任何有价值的免疫优势抗原基因在BCG中以不同水平进行差异表达，进一步诱导机体产生最佳的免疫反应，并通过动物实验筛选理想的候选重组BCG疫苗。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 分支 杆菌 差异 表达 系统 及其 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
1、一种分支杆菌差异表达系统，其特征是以结核杆菌furA基因调控序列及其突变体为启动子，实现外源基因在分支杆菌中差异表达；通过下述方法制备：用突变引物对结核分支杆菌furA基因操纵子序列PCR扩增，分别产生启动子pfurA、启动子pfurAm，启动子pfurAa，启动子pfurAma后，所述的pfurA系列克隆至启动子探针载体pMC210，并亚克隆至父系穿梭载体pMV261中，取代其BCG phsp60启动子及部分酶切位点，建立分支杆菌差异表达载体，命名为pMFA系列。
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