[发明专利]黄瓜霜霉病抗性主效QTL连锁的分子标记方法和应用方法

摘要

本发明涉及的是一种分子生物技术领域的黄瓜霜霉病抗性主效QTL连锁的分子标记方法和应用方法。其分子标记方法：由杂种F₁自花授粉获得F₂子代，通过子代单粒传获得F₇代的重组自交系；对重组自交系每个株系的基因型进行描述；用获得的分子标记资料构建遗传连锁图；测定重组自交系每个株系的霜霉病抗性；对可能存在QTL的区间进行复合区间作图。其应用方法：将通过S94及其衍生品系为父本或母本与其他黄瓜杂交并繁衍至F₂代以上；分离单个黄瓜植株的基因组DNA，检测每个黄瓜植株是否存在与霜霉病主效QTL相连锁的分子标记。本发明发展一种高效、快速育种技术，利用常规抗霜霉病育种方法选育新品种，减少育种家的工作量，提高选择的准确性和育种效率。

主权项

1、一种黄瓜霜霉病抗性主效QTL连锁的分子标记方法，是通过以下步骤获得：a)得到黄瓜霜霉病抗病品种S94(♀)和黄瓜霜霉病感病品种S06(♂)和杂交，得到杂种F1；b)由杂种F1自花授粉获得F2子代，通过子代单粒传方法获得F7代的重组自交系；c)对重组自交系每个株系进行分子标记分析，并对重组自交系每个株系的基因型进行描述；具体方法：分离重组自交系每个株系的基因组DNA，采用相关序列扩增多态性、微卫星、序列特异性扩增区和序列标签位点分子标记引物进行PCR扩增，扩增产物在1.5％琼脂糖凝胶和6g/100ml聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离后，获得分子标记资料；d)基于孟德尔和摩尔根遗传连锁和分离规律，用获得的分子标记资料构建遗传连锁图；e)测定重组自交系每个株系的霜霉病抗性；f)将重组自交系每个家系的霜霉病抗性与黄瓜遗传连锁图中的分子标记进行连锁和QTL分析，QTL分析采用WinCart QTL2.1进行，先进行测验，P＜0.005表明该标记与霜霉病抗性连锁，可能存在QTL，然后对可能存在QTL的区间进行复合区间作图，以2.5为LOD阈值，大于2.5说明存在一个QTL位点，从而确定与抗源S94霜霉病抗性主效QTL的分子标记E23m18d、CMBR40和CMBR97。