[发明专利]建立神经元烟碱型乙酰胆碱亚型受体细胞模型的方法无效
| 申请号： | 200810041461.8 | 申请日： | 2008-08-07 |
| 公开（公告）号： | CN101333532A | 公开（公告）日： | 2008-12-31 |
| 发明（设计）人： | 殷明;沈颖华;石莎;聂惠贞 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/85;C12N5/10;C12Q1/68;G01N33/68 |
| 代理公司： | 上海交达专利事务所 | 代理人： | 王锡麟;王桂忠 |
| 地址： | 200240*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及的是一种生物技术领域的建立神经元烟碱型乙酰胆碱亚型受体细胞模型的方法，包括如下步骤：第一步，通过双酶切后产物定向连接将APP695基因克隆进pcDNA3.1(－)质粒；第二步，将pcDNA3.1(－)－APP695用脂质体方法转染进SH－EP1－α7细胞并用筛选抗生素进行加压筛选；第三步，用逆转录－聚合酶链反应方法检测APP695 mRNA表达；第四步，用Western－blotting检测细胞克隆APP695蛋白表达；用ELISA检测细胞外液中Aβ的表达。本发明建立神经元烟碱型乙酰胆碱α7亚型受体和Aβ共表达的细胞模型，可用于研究α7烟碱受体亚型的激动对于Aβ水平及APP加工修饰的影响，为对烟碱受体亚型在AD发病作用的研究提供了有力工具。 | ||
| 搜索关键词： | 建立 神经元 烟碱 乙酰胆碱 受体 细胞 模型 方法 | ||
【主权项】：
1、一种建立神经元烟碱型乙酰胆碱亚型受体细胞模型的方法，其特征在于，包括如下步骤：第一步、表达载体pcDNA3.1(-)-APP695的构建：将APP695基因克隆进pcDNA3.1(-)质粒，选择Hind III和Xba I为进行双酶切的工具酶；第二步、稳定转染：将pcDNA3.1(-)-APP695用脂质体方法转染进SH-EP1-q7细胞并用筛选抗生素进行加压筛选；然后用有限稀释法将细胞进行单克隆化；第三步、稳定转染细胞克隆APP695 mRNA表达的鉴定：用逆转录-聚合酶链反应方法检测APP695 mRNA表达；第四步、稳定转染细胞克隆APP695和Aβ蛋白表达的鉴定：用Western-blotting检测细胞克隆APP695蛋白表达；用ELISA检测细胞外液中Aβ的表达。
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