[发明专利]一种动物源细菌对氨基糖苷类药物耐药基因四重PCR检测技术无效
| 申请号： | 200810045823.0 | 申请日： | 2008-08-15 |
| 公开（公告）号： | CN101392287A | 公开（公告）日： | 2009-03-25 |
| 发明（设计）人： | 王红宁;张安云;周万蓉;田国宝;吴琦;杨鑫;夏青青 | 申请（专利权）人： | 四川大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 610064四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种动物源细菌对氨基糖苷类药物耐药基因四重PCR检测技术，根据氨基糖苷类药物主要的4个耐药基因(aphA3、aacC4、aadA、aacC2)的核苷酸序列而设计、合成4对相应的特异性PCR引物，通过四重PCR技术对这四个耐药基因进行扩增。利用本发明，根据琼脂糖凝胶电泳特异性条带的出现即可判定结果，可用于检测临床分离菌中4种氨基糖苷类耐药基因。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 动物 细菌 氨基 糖苷 类药物 耐药 基因 pcr 检测 技术 | ||
【主权项】：
1、一种动物源细菌对氨基糖苷类药物耐药基因四重PCR检测技术，含有PCR模板制备试剂和细菌耐药基因四重PCR扩增试剂，其特征在于：所述PCR模板制备试剂是由洗涤液、样品处理液组成，所述细菌耐药基因四重PCR扩增试剂包括10倍PCR缓冲液组分为50mMKCl、pH8.3的10mM Tris.HCI和0.01％明胶，浓度均为2.5mmol/L的dGTP、dCTP、dATP和dTTP，浓度为25mM/L MgCl2，四大类耐药基因即aphA3基因、aacC4基因、aadA基因、aacC2基因的特异性上下游引物浓度均为25mmol/L，浓度为2.5U/μl Taq DNA聚合酶和超纯水。所述动物源细菌对氨基糖苷类药物耐药基因四重PCR扩增试剂各组分的终浓度如下：1倍PCR缓冲液，dGTP、dCTP、dATP和dTTP的终浓度均为0.25mmol/L，MgCl2的终浓度为2.5mM/L，4类药物耐药基因特异性引物aphA3、aacC4、aadA和aacC2的终浓度分别为0.125mmol/L、0.2mmol/L、0.45mmol/L和0.225mmol/L，Taq DNA聚合酶终浓度为1U/50μl。
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