[发明专利]隐孢子虫属及微小隐孢子虫种特异PCR检测试剂盒及检测方法无效
| 申请号： | 200810050956.7 | 申请日： | 2008-07-11 |
| 公开（公告）号： | CN101353690A | 公开（公告）日： | 2009-01-28 |
| 发明（设计）人： | 张西臣;李建华;李巍;宫鹏涛;张国才;杨举;李淑红 | 申请（专利权）人： | 吉林大学 |
| 主分类号： | C12Q1/04 | 分类号： | C12Q1/04;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 | 代理人： | 陈宏伟 |
| 地址： | 130062吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 本发明提供一种隐孢子虫属及微小隐孢子虫种特异PCR检测试剂盒，包括DNA裂解液、PCR反应液、隐孢子虫属和微小隐孢子虫种特异性引物及阳性对照微小隐孢子虫基因组DNA，利用PCR的特异性检测方法，根据分析属特异及种特异的诊断序列设计属和种特异引物，通过优化扩增条件来提高其敏感性，电泳分析直接观察扩增结果。本发明试剂盒设计严谨，简单易操作，灵敏性高，特异性强，能同时鉴定属特异和种特异隐孢子虫感染，结果判定准确客观。 | ||
| 搜索关键词： | 孢子 微小 特异 pcr 检测 试剂盒 方法 | ||
【主权项】：
1、一种隐孢子虫属及微小隐孢子虫种特异PCR检测试剂盒，包括以下部分：(1)DNA裂解液：含不同浓度的NaCl、Tris-HCl、EDTA、SDS和蛋白酶K的混合溶液；各浓度配比为：NaCl 100mM、Tris-HCl(pH7.5)20Mm、EDTA25 Mm、SDS 2％(w/v)和蛋白酶K 0.1μg/μl；(2)PCR反应液：终浓度各100-300μM的4种dNTPs，终浓度各0.5-3pmol/μl的引物CF、CR、HF和HR，1.5-4.5mM的Mg2+浓度；Taq酶按每个PCR反应(20μl)含2.0U加入，反应液中不含Taq酶；(3)隐孢子虫属和微小隐孢子虫种特异性引物：属特异性诊断引物：CF：5’-ATTGGAGGTTGTTCCTTACTCCT-3’ CR：5’-AGCCGCCCATAGAATCAAGAA-3’种特异性诊断引物：HF：5′-TAAGAAGCCACCAAGAAGGCG-3′ HR：5′-TCAATAGGCTTAAATGGGTTCGGGA-3(4)阳性对照：本发明的试剂盒所用阳性对照为微小隐孢子虫基因组DNA，其作用是比较PCR产物以及监测PCR操作过程是否正确。
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