[发明专利]利用高保真DNA聚合酶介导的替换性引物延伸反应进行序列分析的方法无效
| 申请号： | 200810052351.1 | 申请日： | 2008-02-29 |
| 公开（公告）号： | CN101519687A | 公开（公告）日： | 2009-09-02 |
| 发明（设计）人： | 李凯;张佳 | 申请（专利权）人： | 李凯 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 | 代理人： | 陆 艺 |
| 地址： | 215004江苏省苏州市三香路*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用高保真DNA聚合酶介导的替换性引物延伸反应进行序列分析的方法，步骤为：(1)准备耐3’-5’核酸外切酶消化的引物；(2)以单一种类的荧光标记ddNTP与非荧光标记同种类dNTP为底物，在不具有3’-5’核酸外切酶活性DNA聚合酶催化下，进行部分性链终止引物延伸反应；(3)耐3’-5’核酸外切酶消化的dNTP在具有3’-5’核酸外切酶活性的高保真DNA聚合酶催化下进行的替换性引物延伸反应；(4)偶联部分性链终止引物延伸反应和替换性引物延伸反应并重复。本发明因需要延伸的引物不随测序的进行而明显减少，故每一测序引物可测定较长的序列，与多种技术平台相容，适宜于基于芯片的序列分析。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 高保真 dna 聚合 酶介导 替换 引物 延伸 反应 进行 序列 分析 方法 | ||
【主权项】：
1. 一种利用高保真DNA聚合酶介导的替换性引物延伸反应进行序列分析的方法，其特征是包括如下步骤：(1)准备耐3’-5’核酸外切酶消化的引物并对这些引物可实际参与反应的三末端自由羟基进行定量测定；(2)以单一种类的荧光标记的ddNTP与非荧光标记的同一种类dNTP为混合底物，在不具有3’-5’核酸外切酶活性DNA聚合酶催化下，进行部分性链终止引物延伸反应；(3)人工合成的耐3’-5’核酸外切酶消化的dNTP在具有3’-5’核酸外切酶活性的高保真DNA聚合酶催化下进行的替换性引物延伸反应；(4)偶联部分性链终止引物延伸反应和替换性引物延伸反应并重复使用这一偶联过程。
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