[发明专利]诱导马铃薯晚疫病菌产生致病性分泌蛋白的方法无效
| 申请号： | 200810058273.6 | 申请日： | 2008-04-11 |
| 公开（公告）号： | CN101250573A | 公开（公告）日： | 2008-08-27 |
| 发明（设计）人： | 周晓罡;孙茂林;张绍松;丁玉梅 | 申请（专利权）人： | 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 |
| 主分类号： | C12P21/00 | 分类号： | C12P21/00;C12R1/645 |
| 代理公司： | 昆明正原专利代理有限责任公司 | 代理人： | 金耀生 |
| 地址： | 65022*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种诱导马铃薯晚疫病菌产生致病性分泌蛋白的方法。其方法是将马铃薯晚疫病病样置于普通水琼脂培养基进行保湿培养，待叶片上长出灰白色霉层，用接种针挑取少量菌丝接种到普通固体培养基，16～18℃暗培养；形成较大的菌落后，将菌丝块转接到100mL致病性分泌蛋白液体诱导培养基中，于18℃，150rpm振荡培养14～16天后，用双层灭菌滤纸滤去菌丝体，滤液经4000rpm离心10min，上清液加入硫酸铵(697g/L)，10000rpm离心20min，沉淀经透析处理，冻干后获得马铃薯晚疫病菌致病性分泌蛋白提取物，－20℃保存。此方法可以诱导马铃薯晚疫病菌大量产生致病性分泌蛋白，填补了国内外马铃薯晚疫病菌致病机理研究中不能获得致病性分泌蛋白的空白，具有重大意义。 | ||
| 搜索关键词： | 诱导 马铃薯 晚疫病 产生 致病性 分泌 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
1、诱导马铃薯晚疫病菌产生致病性分泌蛋白的方法，其步骤为：(1)将马铃薯晚疫病病样置于普通水琼脂培养基，16～18℃黑暗保湿培养2～3天；普通水琼脂培养基由以下部分组成：琼脂粉10g/L、H2O 1L；(2)叶片上长出灰白色霉层，用接种针挑取少量菌丝接种到普通固体培养基，16～18℃暗培养8～10天，形成较大菌落；普通固体培养基由以下部分组成：黑麦浸出液450ml、番茄汁150ml、琼脂粉10g/L、CaCO3 1.2g/L、阿莫西林100mg/L、五氯硝基苯30mg/L、利福平10mg/L、制霉菌素10mg/L、H2O 1L；(3)用接种针挑取5块约0.5cm2的菌丝块转接到100mL致病性分泌蛋白液体诱导培养基中，18℃，150rpm振荡培养14～16天；致病性分泌蛋白液体诱导培养基由以下部分组成：黑麦浸出液450ml、CaCO3 1.2g/L、阿莫西林100mg/L、五氯硝基苯30mg/L、利福平10mg/L、制霉菌素10mg/L、H2O 1L；(4)用双层灭菌滤纸滤去菌丝体，滤液经4000rpm离心10min，上清液加入硫酸铵697g/L，10000rpm离心20min，沉淀经透析处理，冻干后获得马铃薯晚疫病菌致病性分泌蛋白提取物，-20℃保存。
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