[发明专利]一种通过游离小孢子培养获得马蹄莲单培体植株的方法

摘要

本发明涉及一种通过游离小孢子培养获得马蹄莲(Zantedeschia aethiopica)单培体植株的方法，属花卉育种技术领域。本方法步骤为：取小孢子处在单核靠边期的马蹄莲雄蕊、消毒；机械游离小孢子，用NLN-13％果糖培养基调整细胞密度至1.0×10⁵小孢子/ml，然后在32℃、黑暗条件下预培养游离小孢子2天，再转入25℃、黑暗条件下预培养5天，预培养后更换培养基为NLN-13％蔗糖培养基，在25℃、黑暗条件下继续培养，小孢子发育为愈伤组织，愈伤组织经芽分化途径形成单倍体植株。本方法获得的马蹄莲单培体植株经染色体加倍，只需要一个世代就获得遗传上稳定的纯系，通过产生单培体植株而获得纯系是有效加速育种材料的纯化与育种进程的一条途径。

主权项

1、一种通过游离小孢子培养获得马蹄莲单培体植株的方法，包括游离小孢子的分离和纯化、游离小孢子悬液的预处理和小孢子培养、愈伤组织分化芽及芽生根步骤，其特征在于：a. 游离小孢子悬液的预处理：在NLN-13％果糖培养基中分离和纯化小孢子，并用NLN-13％果糖培养基预培养小孢子7天，即在32℃、黑暗条件下培养2天，转入25℃、黑暗条件下培养5天，进行果糖预处理；b. 小孢子培养：游离小孢子悬液在经上述果糖预预处理7天后，更换培养基为NLN-13％蔗糖培养基，在25℃、黑暗条件下继续培养50天，小孢子发育形成愈伤组织；c. 愈伤组织分化芽：将上述愈伤组织移置芽诱导培养基，诱导生芽，芽诱导培养基配方为B5+蔗糖30g/L+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+琼脂7g/L，pH5.8，培养条件：温度25℃，光强2000Lx，光照时间16小时，培养30天后愈伤组织分化出芽。