[发明专利]重组耐高温超氧化物岐化酶的高密度发酵与纯化工艺有效
| 申请号： | 200810061168.8 | 申请日： | 2008-03-13 |
| 公开（公告）号： | CN101275144A | 公开（公告）日： | 2008-10-01 |
| 发明（设计）人： | 孟凡国;夏勇;王天文;胡卫江;周海梦 | 申请（专利权）人： | 浙江清华长三角研究院;嘉兴博泰生物科技发展有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/53 | 分类号： | C12N15/53;C12N15/70;C12N9/08;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州九洲专利事务所有限公司 | 代理人： | 翁霁明 |
| 地址： | 314050浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 一种重组耐高温超氧化物岐化酶的高密度发酵与纯化工艺，所述的构建方法包括：以嗜热菌中编码SOD的基因为模板，设计带有限制性酶切位点的特异引物扩增目的基因，经双酶切后连接于经相同酶切处理后的质粒载体pET28a中，构建重组质粒，命名为pSOD，然后经化学转化法将质粒pSOD转化至感受态大肠杆菌BL21(DE3)，经筛选，获得高产SOD的菌株，完成SOD工程菌的构建；所述的发酵工艺：发酵过程经过一级种子培养、二级种子培养、上罐发酵、诱导表达四个步骤，最终获得发酵产物——SOD；本发酵方法可以实现SOD的高效表达，目的蛋白的表达量占菌体蛋白总量的60％以上；它具有SOD有良好热稳定性与耐热性，表达产物占全菌蛋白的60％以上，且全部为可溶性蛋白，避免了包含体复性过程的种种麻烦；纯化工艺简单，产率高，成本低廉，终产物SOD的纯度高、活力高、稳定性强等特点。 | ||
| 搜索关键词： | 重组 耐高温 超氧化物 岐化酶 高密度 发酵 纯化 工艺 | ||
【主权项】：
1. 一种重组耐高温超氧化物岐化酶的高密度发酵与纯化工艺，它包括：以嗜热菌中编码SOD的基因为模板，设计带有限制性酶切位点的特异引物扩增目的基因，经双酶切后连接于经相同酶切处理后的质粒载体pET28a中，构建重组质粒，命名为pSOD，然后经化学转化法将质粒pSOD转化至感受态大肠杆菌BL21(DE3)，经筛选，获得高产SOD的菌株，完成SOD工程菌的构建。
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