[发明专利]一种克隆多拷贝T－DNA旁侧植物DNA序列的方法有效
| 申请号： | 200810064648.X | 申请日： | 2008-06-02 |
| 公开（公告）号： | CN101285084A | 公开（公告）日： | 2008-10-15 |
| 发明（设计）人： | 景天忠;王志英;齐凤慧 | 申请（专利权）人： | 东北林业大学;景天忠;王志英 |
| 主分类号： | C12P19/34 | 分类号： | C12P19/34;C12N15/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 150040黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种可有效克隆含多拷贝T－DNA遗传修饰植物中T－DNA旁侧植物DNA序列的方法。本发明的主要步骤是用限制性内切酶切去除与植物DNA相连的部分T－DNA序列以外的其它T－DNA序列，然后进行2轮TAIL－PCR。酶切位点位于T－DNA上的NOS poly A区或/和35S poly A区，TAIL－PCR所用嵌套引物也是根据T－DNA上的NOS poly A区和35Spoly A区的序列设计，因此本方法具有通用性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 克隆 拷贝 dna 旁侧 植物 序列 方法 | ||
【主权项】：
1、一种克隆转基因植物中多拷贝T-DNA旁侧植物DNA序列方法，包括以下步骤：(1)常规方法提取转基因植物基因组DNA。(2)对步骤1中所述的DNA进行酶切反应。(3)常规方法将步骤(2)中所述的酶切产物分离为两部分，回收大于5kb的片段部分。(4)以步骤(3)中所述的回收片段为模板，进行TAIL-PCR扩增2轮。(5)按常规方法纯化、克隆步骤(4)中所述的TAIL-PCR产物。使用PCR法筛选阳性克隆后常规方法进行测序，得到T-DNA旁侧的植物DNA序列。
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