[发明专利]重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的高效稳定表达和纯化及其应用

摘要

本发明提供了重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的高效稳定表达和纯化的技术方法。重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin在酵母细胞中的大量表达及目的蛋白的纯化，纯化蛋白在SDS-PAGE电泳中呈现为一条带。该重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的获得方法具有直接表达、成本低，稳定性高，表达量高、分离纯化工艺简便、活性高等特点。本发明发现本重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin不仅具有接近于野生型蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的抑制血小板聚集的活性，而且首次验证了其能够抑制肿瘤细胞生长的活性，从而能够作为一种新型抗血栓和抗肿瘤新药。

主权项

1、重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的高效稳定表达和纯化的方法，包括如下步骤：1)、重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的高效稳定表达：以全长Jerdonitin基因为模板，设计正向引物和反向引物，进行PCR扩增目的基因；将此目的基因与克隆载体经限制性内切酶酶切；然后连接目的基因和克隆载体，获得含目的基因Jerdonitin的重组质粒；重组质粒转入大肠杆菌进行扩增；大量抽提重组质粒；重组质粒经过酶切线性化后，将此重组质粒电转入到酵母表达菌株中，建立能稳定表达Jerdonitin的工程菌株；在甲醇诱导下表达Jerdonitin；2)、重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的纯化方法：根据表达的蛋白的性质，选择用阴离子琼脂糖柱阶段性洗脱初步捕获蛋白，再用凝胶层析柱和阴离子交换柱纯化，可获得纯度较高的蛋白。