[发明专利]一种大批量快速制备PCR模板的方法

摘要

一种大批量快速制备PCR模板的方法，属植物分子检测技术领域，具体涉及植物组织在裂解液中加热裂解和裂解液中和。本发明的技术方案是：将微量植物叶片放入一定体积的裂解液中加热裂解，然后中和，反应混合液可直接作为PCR反应的模板，在添加适量聚合酶稳定剂的情况下，PCR反应稳定，重复性强。该方法特别适宜大批量PCR反应模板的快速制备，可以大幅度提高分子检测和遗传分析的效率，极显著地降低成本。

主权项

1、一种大批量快速制备PCR模板的方法，其特征在于通过以下步骤实现：(1)量取等体积的Solution A和Solution B，添加灭菌双蒸水并充分混匀后得裂解液，备用；所述的Solution A为1mol/L KOH的水溶液；Solution B为20％Tween-20的水溶液；所述灭菌双蒸水的添加量为Solution A使用量的8倍；(2)取50uL裂解液于离心管中，然后置测试材料于离心管的裂解液中，短暂离心后，在PCR仪上93～98℃保持10～15min；(3)取出离心管并迅速放冰上；向离心管中加入50uL的Solution C，混匀，即可直接用作PCR反应模板；所述Solution C为TE缓冲液，组成成分为0.1M Tris-HCl和2mM EDTA的水溶液；(4)模板的PCR检测，在PCR反应体系配制的过程中，先添加Solution D2.5uL/每管；然后进行PCR反应和电泳成像；所述Solution D为1％BSA水溶液。