[发明专利]甘蔗宿根矮化病菌PCR快速检测方法

摘要

本发明涉及甘蔗RSD病菌的快速裂解和PCR检测技术。本发明通过Buffer A和Buffer B裂解甘蔗RSD病菌，用PCR检测技术快速检测出Leifsonia xyli subsp.xyli病菌。本发明的检测灵敏度比常规CTAB裂解提取DNA的方法高，且具有快速、简便、成本低、无污染的特点，具备较高的灵敏性和准确性。本发明可用于大规模甘蔗RSD病菌的PCR检测。

主权项

1、一种甘蔗宿根矮化病菌PCR快速检测方法，其特征在于具体步骤如下：(1)提取蔗汁：在甘蔗的基部节间取蔗汁1～1.5mL置离心管A中，室温下3000rpm离心4～6min，取上清液300～400μL放入离心管B中，室温下12000rpm离心8～12min，弃上清，取沉淀；(2)病菌裂解：在收集到的沉淀中加入50μL Buffer A，混匀，稍离心；95℃水浴10min，取出放置冰上3min；加入50μL Buffer B，混匀；稍离心后静置备用；所述Buffer A为100mM NaOH与2％Tween 20水溶液的混合液；Buffer B为100mM Tris-Hcl与2mM EDTA水溶液的混合液；(3)模板PCR检测和电泳成像。