[发明专利]细胞内病原微生物核酸定量提取和纯化方法

摘要

本发明公开了一种细胞内病原微生物核酸定量提取纯化方法，细胞内病原微生物核酸定量提取纯化试剂盒，以及该试剂盒在定量检测细胞中病原微生物感染中的用途。

主权项

1.一种定量提取和纯化动物细胞内病原微生物核酸的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：1)提供填充吸附核酸的含硅固相材料的纯化柱或吸附核酸的含硅磁珠，其饱和吸附容量根据需要预先确定，并根据下列的公式计算被定量提取和纯化样品的细胞数量n：n＝A/G，其中G为每个二倍体动物细胞中基因组DNA的量，A为所述核酸吸附材料的饱和吸附容量；2)提供待纯化细胞样品，所述待纯化细胞样品中含有的细胞数量必须不低于步骤1)中所计算的n值；3)将上述细胞样品离心，将裂解液加入至所得细胞沉淀中，涡旋混合至溶液澄明，根据需要加热以促进被提取的核酸及基因组DNA与蛋白分离或使蛋白降解，使被提取的核酸及基因组DNA释放到溶液中，根据需要离心以去除细胞碎片；如果裂解液中不含促进核酸分子与含硅材料可逆吸附的结合剂，则向离心后获得的上清液中加入适量的结合剂。4)将步骤3)中获得的溶液转移至纯化柱中或在其中加入磁珠，将所述纯化柱离心去除液相；或将溶液与磁珠的混合物用磁力分离磁珠和液相；5)用洗涤液清洗经步骤4)处理过的纯化柱或磁珠1-4次，用离心或磁分离方法去除液相；6)将洗脱液加入至经步骤5)清洗的纯化柱或磁珠中用离心或磁分离方法洗脱核酸。