[发明专利]一种用于限制片段长度多态性研究的家蚕DNA抽提方法

摘要

本发明公开了一种用于限制片段长度多态性研究的家蚕DNA抽提方法，以家蚕个体为研究对象，解剖后取后部丝腺；加入液氮后经充分研磨后，充分酶解后，用酚进行抽提后，用正丁醇浓缩后用乙醇进行沉淀；RNase处理后，经酚、氯仿抽提后，用正丁醇浓缩后用乙醇进行沉淀。严格控制实验环节，每头家蚕可抽提高纯度DNA(OD_260/280＞1.9)200μg，可用于200次RFLP检测。该发明解决了目前以家蚕为材料的RFLP研究DNA纯度不高和抽提的DNA量过少的问题。

主权项

1.一种用于限制片段长度多态性研究的家蚕DNA抽提方法，包括解剖家蚕取出后部丝腺，从家蚕个体的后部丝腺抽提DNA，再采用RNA酶消解RNA，所述解剖家蚕取出后部丝腺的具体步骤为，在无菌条件下解剖家蚕，取后部丝腺，经磷酸盐缓冲液冲洗，将后部丝腺研磨至粉末；其特征在于：从后部丝腺抽提DNA和采用RNase酶消解RNA的具体步骤为：(1)采用DNA酶解缓冲液融化后部丝腺粉末，混匀后将溶液于48～55℃水浴裂解6～8小时；(2)加入与步骤(1)中溶液等体积的饱和酚，混匀后离心，取上清液，提取DNA；取与上清液等体积的正丁醇与上清液混匀，离心后弃上清液，重复离心弃上清液的过程至少1次，浓缩至步骤(1)中溶液体积的以下；采用无水乙醇和醋酸钠析出DNA，然后用TE缓冲液溶解DNA，混匀后至少放置0.5小时；(3)于35～39℃水浴中，采用RNase酶处理步骤(2)中的DNA溶液，消解去除RNA；加入与DNA溶液等体积的饱和酚，混匀后离心，除去下层的酚层，再加入同样体积的饱和酚，混匀后离心，取上清液；(4)取与步骤(3)中的饱和酚等体积的酚氯仿，与步骤(3)所得的上清液混匀后离心，取上清液，并取与之等体积的正丁醇混合均匀，离心后弃上清，重复离心后弃上清的过程至少1次，浓缩至步骤(2)中的DNA溶液体积的以下；采用无水乙醇和醋酸钠析出DNA，用70～75％的乙醇洗盐洗涤，溶解于TE缓冲液中。