[发明专利]以连接后筛选为基础的定向基因重组试剂盒

摘要

本发明涉及生物领域一种基因重组技术，旨在提供一种成本低，技术简单，操作周期短的定向基因重组试剂盒。试剂盒由定向重组载体，定向扩增体系，定向连接复合物和鉴定用引物构成中一种或者若干种构成。在传统的非定向基因重组技术基础上，定向重组载体和错误连接的目的基因之间形成的筛选用酶切位点。利用限制性核酸内切酶对错误连接形成的筛选用酶切位点进行处理，使反向连接的目的基因难以进入细胞克隆扩增。之后利用鉴定引物和原扩增引物的组合对重组产物进行PCR鉴定确认目的基因连入载体并连接正确。本发明适用于常规基因表达尤其是大规模的基因表达操作。

主权项

1、本发明涉及生物技术领域中一种以连接后筛选为基础的定向基因重组试剂盒，由定向重组载体，定向扩增体系，定向连接复合物和鉴定引物中一种或者若干种构成；其特征在于，目的基因经过定向扩增以后和定向重组载体非定向连接，由限制性内切酶对错误连接产物在连接点处形成的酶切位点进行切割，使其难以进入宿主细胞或者进入细胞后难以复制，而正确连接的产物则不受其影响；最后通过鉴定引物和原扩增用引物联合对目的基因连接的状态进行鉴定。