[发明专利]定量测定植物中草药提取成分中雌二醇含量的方法

摘要

本发明涉及定量测定中草药提取成分中生化成分的方法，具体地说是一种定量测定植物中草药提取成分中雌二醇含量的方法。该方法应用雌二醇定量测定试剂盒所提供的试剂，使用该试剂盒的使用说明书所提供磁分离酶联免疫法，其特征是：将植物中草药提取液作为标本，按该试剂盒的使用说明书的步骤进行操作。本发明尤其适用于测取沙棘叶提取物、葛根提取物中的雌二醇含量，对研究分析不同产地、不同采摘季节、不同批次等沙棘叶、葛根的雌二醇含量，指导沙棘叶、葛根作为补充雌激素产品的开发利用具有重要意义。

主权项

1、定量测定植物中草药提取成分中雌二醇含量的方法，应用雌二醇定量测定试剂盒所提供的试剂，使用该试剂盒的使用说明书所提供磁分离酶联免疫法，其特征是：将植物中草药提取液作为标本，按该试剂盒的使用说明书的步骤进行操作；具体按下述三步骤：a、第一次孵育-免疫反应，b、第二次孵育-酶反应，c、读取吸光值；a、第一次孵育-免疫反应a.1、吸取45ul各浓度标准品、质控品、标本，加之标记好的相应试管的底部；a.2、加60ulE2抗试剂至各试管，混匀；a.3、试管连架置37℃水浴20分钟；a.4、加60ul E2衍生物至各试管，混匀；a.5、试管连架置37℃水浴20分钟；a.6、加60ul磁分离试剂至各试管，混匀；a.7、试管连架置37℃水浴5分钟；a.8、试管连架放入磁分离器，磁场中沉淀2分钟，确保每支试管底部都与分离器表面接触；a.9、用一大而缓慢的圆周运动倒转分离器，倒出上清液，把倒转的试管放在滤纸上，用强有力的动作拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴；a.10、放正分离器，加150ul稀释后的清洗液至各试管；a.11、放至涡旋机，激烈振荡，彻底混匀；a.12、试管连架放人磁分离器，磁场中沉淀2分钟；确保每支试管底部都与分离器表面接触；a.13、用一大而缓慢的圆周运动倒转分离器，倒出上清液，把倒转的试管放在滤纸上，用强有力的动作拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴；a.14、重复a.10-a.13步骤两次；b、第二次孵育-酶反应b.1、为磁分离免疫测定仪校零，准备1支空白试管，做好标记，放置试管架上；b.2、从分离器取出试管架，加90ul基质至各试管，包括空白管；彻底混匀；b.3、试管连架置37℃水浴30分钟；b.4、加300ul终止液至各试管，包括空白管，其顺序与加基质顺序相同；b.5、把试管架放人磁分离器，沉淀时间不少于10分钟；c、读取吸光值用空白管在550nm校零；在550nm、492nm读取标准品、质控品、标本的吸光值。