[发明专利]表达新城疫病毒NP基因的重组T4噬菌体的构建及其应用无效
| 申请号： | 200810154337.2 | 申请日： | 2008-12-23 |
| 公开（公告）号： | CN101760467A | 公开（公告）日： | 2010-06-30 |
| 发明（设计）人： | 苏建东;王小娥;李旭东 | 申请（专利权）人： | 天津瑞普生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/45 | 分类号： | C12N15/45;C12N15/63;C12N7/01;G01N33/569 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300300 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明提供了一个表达鸡新城疫病毒核壳蛋白基因(NP)的重组T4噬菌体，该重组T4噬菌体具有新城疫病毒核壳蛋白基因(NP)的核苷酸序列和NP蛋白的氨基酸残基序列。NDVF48E9国内标准强毒株及质粒pET30a均由哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室保存。NDV F48E9国内标准强毒株NP基因的重组质粒pGFP-NP由哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室构建。本发明还涉及重组T4噬菌体具有检测鸡血清中ND抗体的用途。 | ||
| 搜索关键词： | 表达 新城 疫病 np 基因 重组 t4 噬菌体 构建 及其 应用 | ||
【主权项】：
含有新城疫病病毒核壳蛋白基因(NP)的重组T4噬菌体的构建方法，其特征在采用基因重组的方法获得的，其方法是：用Hind III和Not I在37℃分别消化NP基因的PCR产物和质粒pET30a，接着在T4连接酶的作用之下，连接消化的NP基因的PCR产物和质粒pET30a，用连接产物转化大肠杆菌DH5α，经Amp′抗性筛选，获得插入了NP基因的重组子，然后用1对通用引物进行PCR筛选；对PCR筛选阳性的细菌，挑取单菌落接种于3mL。LB培养基中，37℃，200r/m振摇培养16-20小时，抽提质粒，再经限制性内切酶消化和序列测定，获得含有新城疫病病毒核壳蛋白基因(NP)的重组整合质粒pET30a-NP；用重组整合质粒pET30a-NP和缺陷性T4噬菌体T4-Z1进行同源重组，获得表达NP蛋白的重组T4噬菌体。
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