[发明专利]一种运用动态光散射高灵敏检测微囊藻毒素的方法

摘要

一种运用动态光散射高灵敏检测微囊藻毒素-LR的方法，属于免疫分析化学技术领域。本发明合成的金纳米粒子与微囊藻毒素的包被原偶联得金连包被原，金纳米粒子与抗微囊藻毒素的抗体相连得金连抗体，用抗体和包被原的金纳米粒子进行免疫反应，利用柠檬酸三钠还原在液体的环境下金连抗体和金连包被原及微囊藻毒素反应形成二聚体，寡聚体及产生聚沉，通过动态光散射测定液体环境中的粒径分布来测定微囊藻毒素的含量。本发明只在液体环境中反应，不需要清洗的步骤，只需要一步反应，简化了反应的条件，提高了检测的灵敏度，达到国际领先水平。

主权项

1. 一种运用动态光散射检测微囊藻毒素的方法，其特征是用合成的金纳米粒子与微囊藻毒素的包被原偶联得金连包被原，金纳米粒子与抗微囊藻毒素的抗体相连得金连抗体，用抗体和包被原的金纳米粒子进行免疫反应，利用柠檬酸三钠还原在液体的环境下金连抗体和金连包被原及微囊藻毒素反应形成二聚体，寡聚体及产生聚沉，通过动态光散射测定液体环境中的粒径分布来测定微囊藻毒素的含量；包括免疫原、包被原、抗体的制备，纳米金的制备，抗体和纳米金的偶联，包被原和纳米金的偶联，包被原和抗体蛋白浓度的选择，抑制曲线的测定；(1)免疫原的制备：将微囊藻毒素-LR与牛血清蛋白相偶联得到免疫原；(2)包被原的制备：将微囊藻毒素-LR与卵清蛋白相偶联得到包被原；(3)用步骤(1)得到的免疫原免疫得到特异性兔多克隆抗体；(4)金纳米粒子的制备；(5)将步骤(2)得到的包被原与步骤(4)得到的金纳米粒子偶联；(6)将步骤(3)得到的抗体与步骤(4)得到的金纳米粒子偶联；(7)对步骤(2)得到的包被原和步骤(3)得到的抗体蛋白浓度的选择；(8)利用间接竞争免疫检测原理，将微囊藻毒素-LR和金连包被原同时加入到一个离心管中，而后向离心管中加入金连抗体，混匀，通过微囊藻毒素和包被原与抗体进行竞争偶联，通过微囊藻毒素浓度的不同会使形成的粒子形成不同的粒径分布，通过纳米粒度仪检测粒径的变化从而检测微囊藻毒素-LR。