[发明专利]一种三聚氰胺或三聚氰酸的测定方法及它的试剂盒或试纸条

摘要

本发明涉及医学、食品或环境检验与测定技术领域。更具体地，本发明涉及一种三聚氰胺或三聚氰酸的测定方法及它的试剂盒或试纸条，其中所述测定方法包括样品准备、三聚氰酸酶解、二氧化碳与氨的定量测定和数据处理等步骤。本方法测定速度快，灵敏度高，精确度高，再现性好，测定成本低，因而具有广泛应用的前景。

主权项

1、一种三聚氰胺的测定方法，其特征在于该方法的步骤如下：A、样品准备：1)标准样品的制备将1-3份三聚氰胺溶于3-9重量份含有10-40重量％无机强酸与10-40重量％硫酸氢钠的混合溶液中，然后，让该混合溶液在温度150-170℃下加热3-5小时，再将该溶液冷却到室温，然后进行离心分离得到上清液，往其中加入与所述无机强酸同等当量的无机强碱，中和在其溶液中存在的无机强酸，再将三聚氰胺浓度调整到200ppm，得到的溶液作为标准样品；2)样品预处理称取1-3重量份待测定样品，溶于3-9重量份含有10-40重量％无机强酸与10-40重量％硫酸氢钠的溶液中，然后，让该混合溶液在150-170℃下加热3-5小时，再将该溶液冷却到室温，然后进行离心得到上清液，往其中加入与所述无机强酸同等当量的无机强碱，中和在其溶液中存在的无机强酸，这样得到的上清液作为待测样品；3)空白样品含有10-40重量％无机强酸与10-40重量％硫酸氢钠的溶液在温度150-170℃下加热3-5小时，再将该溶液冷却到室温，然后进行离心得到的上清液，往其中加入与所述无机强酸同等当量的无机强碱，中和其溶液中存在的无机强酸，这样得到的上清液作为空白样品，其三聚氰胺浓度为0ppm；B、三聚氰酸酶解：在步骤A)得到的标准样品、待测样品、空白样品在下述条件下分别进行三聚氰酸的酶解反应：B-1)该酶解反应介质含有：缓冲液80-700mmol/L、稳定剂0.01-7mol/L、三聚氰酸酰胺水解酶1000-80000U/L、双缩脲酰胺水解酶1000-80000U/L、脲基甲酸水解酶1000-80000U/L；B-2)三聚氰酸依次在三聚氰酸酰胺水解酶、双缩脲酰胺水解酶与脲基甲酸水解酶的作用下进行酶催化反应，最后得到二氧化碳和氨；B-3)反应温度36-38℃，反应时间8-12分钟；C、二氧化碳与氨的定量测定：首先，制备试剂：试剂1的制备：分别移取或称取缓冲液、稳定剂、谷氨酸脱氢酶、谷氨酸氧化酶、NADH过氧化物酶、丙酮酸脱氢酶、丙酮酸氧化酶、还原型辅酶、α-酮戊二酸、乙酰辅酶A，然后将它们混合均匀，使用时用水将它们溶解得到一种溶液，它们的浓度分别是50-500mmol/L、0.01-7mol/L、1000-80000mmol/L、1000-80000U/L、100-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、0.2-0.3mmol/L、1-20mmol/L与0.5-20mmol/L；它们可以组成单剂试剂或双剂试剂；试剂2的制备：分别移取或称取缓冲液、稳定剂、三聚氰酸酰胺水解酶、双缩脲酰胺水解酶和脲基甲酸水解酶，然后将它们混合均匀，使用时用水将它们溶解得到一种溶液，它们的浓度分别是80-700mmol/L、0.01-7mol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L；然后，把待测样品、所述的试剂1和试剂2加到生化分析仪中使这些试剂浓度达到上述浓度，再在温度36-38℃下在主波长340nm与副波长405nm处分别进行检测8-12分钟；标准样品和空白样品进行同样的检测；D、数据处理由主波长340nm的吸光度变化，根据下式计算得到三聚氰胺含量：ΔA(标准)-ΔA(空白)式中：ΔA(待测样品)表示待测样品的吸光度变化；ΔA(空白)表示空白品的吸光度变化；ΔA(标准)表示标准品的吸光度变化。