[发明专利]一种治疗糖尿病视网膜病变的中药制剂的质量检测方法

摘要

本发明涉及一种治疗糖尿病视网膜病变的中成药的质量检测方法。利用甲醇、乙醇、乙醚、醋酸乙酯等试剂对样品采取了提取、浓缩、过滤、除脂等前处理后，对样品中的黄芪、地黄、枸杞子、决明子等多味药材进行了薄层鉴别，特别是利用高效毛细管电泳指纹图谱对水蛭进行了鉴别，并利用HPLC法测定了制剂中有效成分葛根素的含量，为产品的质量稳定可控，疗效稳定确切提供了可靠保证。

主权项

1、一种治疗糖尿病视网膜病变的中成药的质量检测方法，其特征在于所描述的制剂是由葛根、黄芪、地黄、决明子、茺蔚子、蒲黄、枸杞子和水蛭等八味药材的醇水双提物经浓缩干燥所得，该质量检测方法包括鉴别和/或质量测定的一种或几种。鉴别：a、取固体制剂1.5-3g，加乙醇20-60ml，超声处理10-40分钟，滤过，滤液加氢氧化钾0.5-1.5g使溶解，水浴回流1-3小时，蒸干，残渣加水10-40ml使溶解，用正丁醇10-30ml提取，提取液蒸干，加水1-5ml溶解后上已处理好的D101大孔树脂柱，依次用水50-120ml、10％乙醇30-80ml、30％乙醇30-80ml洗脱，洗脱液弃去，再用70％乙醇30-100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲甙对照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水＝45-65∶20-40∶5-15于10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5％-10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点；b、取固体制剂3-5g，加乙醚30-60ml或甲醇10-40ml，超声处理10-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-1.5ml制成供试品溶液A；或加水5-15ml溶解，上已处理好的大孔树脂和阴离子交换树脂，分别用不同浓度的乙醇和水洗脱，收集洗脱液，减压蒸干，加乙醇5-15ml溶解作为供试品溶液B；另取地黄对照药材，加甲醇制备成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液A；或取梓醇对照品，加甲醇制备成0.5mg/ml的溶液，作为对照品溶液B。照薄层色谱法试验，吸取对照品溶液A和供试品溶液A各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水＝10-20∶30-50∶18-25∶5-15或氯仿-甲醇-浓氨＝12-20∶3-6∶0.5-1.510℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以Goden试液或茴香醛-浓硫酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点；C、取固体制剂0.5-1.5g，加水20-40ml，加热煮沸15分钟，放冷，滤过，滤液用醋酸乙酯10-30ml振摇提取，提取液浓缩至约0.5-1.5ml，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-氯仿-甲酸＝1-5∶1-5∶0.5-1.5或乙醚-冰醋酸-甲醇＝3-8∶0.5-1.5∶0.5-1.5为展开剂展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光主斑点；d、取固体制剂1-3g，加甲醇10-30ml，超声处理20-50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5-15ml及盐酸0.5-1.5ml加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚提取两次，每次10-30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取决明子对照药材1g，同法制备，作为决明子对照药材溶液，取大黄素对照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法，吸取上述三溶液各1-2μl，分别点于同一硅胶H-0.5％CMC薄层板上，以石油醚(30-60℃)-甲酸乙酯-甲酸＝10-20∶3-8∶0.5-1.5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品与对照药材色谱相应位置上显相同的橙色荧光斑点；置氨蒸汽中熏后，斑点变为红色；e、称取固体制剂2-5g，加入10-50ml提取液，提取液包括酸性蛋白提取液、碱性蛋白提取液、中性蛋白提取液、0.9％NaCl提取液中的一种或几种，提取20-60min，提取方法为超声或研磨中的一种或两种，静置，上清液经2000-5000r/min离心分离20-50min，用0.45μm微孔滤膜过滤后，作为供试品溶液。另取水蛭对照药材0.5g，同法制成对照品溶液。照毛细管电泳法测定，电泳缓冲液为硼酸-氯化钠-硼砂系统、磷酸二氢钠-柠檬酸系统、硼酸-碳酸钠系统、甘氨酸+氯化钠-盐酸系统、酒石酸-酒石酸钠系统中的一种或多种，缓冲系统的pH值为8.0-9.5，电泳分离时间为10-40分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，出现相同的HPCE峰，各主成分的相对有效时间相同；含量测定：照高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1％枸橼酸溶液＝20-30∶70-80或甲醇-水-氯仿＝20-30∶70-80∶0.5-1.5或甲醇-水-磷酸＝270-290∶710-730∶0.10-0.20为流动相；检测波长为240-250nm，理论塔板数按葛根素计算应不低于4000；对照品溶液的制备：精密称取葛根素对照品适量，加30％乙醇制成每1ml含80μg的溶液，既得；供试品溶液的制备：取固体制剂0.1-0.3g，研细，加入10％-50％的甲醇或乙醇提取液，超声20-50分钟，提取液上已经处理好的中性氧化铝柱，30-70％乙醇洗脱，收集洗脱液蒸干，溶于10-80ml的30％乙醇溶液中，即得；测定法：分别精密吸取对照品与供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。