[发明专利]一种发酵生产环孢菌素A的方法

摘要

本发明属于生物医药领域，具体公开了一种发酵生产环孢菌素A的方法。该方法以多孔木霉(Tolypocladium inflatum csp3)为出发菌株，主要涉及种子培养基、发酵培养基的新配方及良好的发酵控制工艺等步骤。通过本发明所述的方法，环孢菌素A在前期对数生长期内(90小时)能迅速地获得菌体，后期能充分延长目的产物的分泌时间，最终环孢菌素A的浓度可达5.0g/L，极大的提高了环孢菌素的发酵效价。整个发酵过程操作简单，中间易于控制，通用性强，适合工业化生产。

主权项

一种利用多孔木霉(Tolypocladium inflatum csp3)发酵生产环孢菌素A的方法，其特征在于，包括种子培养基和发酵培养基的制备以及利用该菌株进行的发酵培养，其工艺如下：(1)摇瓶种子液培养：将4℃冰箱保存的新鲜斜面用无菌水充分洗刷，而后将斜面孢子液接种至摇瓶培养基，进行培养；培养基成分和含量为果糖2-15g/L，葡萄糖5-25g/L，豆粉5-25g/L，玉米浆粉2-10g/L；(2)种子培养：按体积百分比，将(1)中生长好的种子按接种量1-2％的比例接种种子罐进行培养；培养基成分和含量为果糖2-15g/L，葡萄糖5-25g/L，豆粉5-25g/L，玉米浆粉2-10g/L，消泡剂1-4g/L；所说的菌种为多孔木霉(Tolypocladium inflatum csp3)；(3)发酵培养：按体积百分比，将(2)中培养好的种子按接种量5-15％的比例移种至发酵罐培养；培养基成分和含量为葡萄糖50-200g/L，磷酸氢二铵3-10g/L，L-Valine 1-10g/L，NaNO3 1-5g/L，KCl 0.1-0.5g/L，MgSO4·7H2O 0.1-0.5g/L，KH2PO4 1-5g/L，ZnSO4·7H2O0.0001-0.0005g/L，MnCl2·4H2O 0.00005-0.0001g/L，消泡剂5-10g/L；90小时前pH控制在4.0-6.0，之后放弃pH的调控，在目的产物进行分泌阶段，进行补料控制，于200-260小时下罐；(4)采用常规方法，从发酵培养产物中收集环孢菌素A。