[发明专利]一种邻苯二甲酸二己酯的酶联免疫检测方法

摘要

一种邻苯二甲酸二己酯的酶联免疫检测方法，属于免疫检测技术领域。本发明利用合成的邻苯二甲酸二己酯免疫原免疫得到多克隆抗体，以邻苯二甲酸二己酯为标准品，以邻苯二甲酸二己酯半抗原与OVA的偶联物作为包被抗原，建立了邻苯二甲酸二己酯的间接竞争酶联免疫分析方法。本发明建立了邻苯二甲酸二己酯的间接竞争ELISA方法，为邻苯二甲酸二己酯的残留检测提供了一种快速高效的检测方法，由于采用的是多克隆抗体，费用较低且稳定性和重复性好。免疫反应的高特异性和亲和性使ELISA具有极高的选择性和灵敏度，灵敏度为0.1ng/mL，线性范围为0～100ng/mL。

主权项

1、一种邻苯二甲酸二己酯的酶联免疫检测方法，其特征在于步骤如下：(1)抗原的包被以邻苯二甲酸二己酯半抗原与卵清蛋白OVA的偶联物作为包被抗原，以0.05M、pH9.6的碳酸盐缓冲溶液将包被抗原以1∶5000～1∶8000进行稀释，作为包被液，在酶标板的每孔中加入100μL，4℃孵育过夜，然后用含0.1％明胶的上述碳酸盐缓冲液200μL/孔作为封闭液，封闭2h；(2)竞争反应每孔分别加入以标准品稀释液PBST稀释的0.01ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL系列浓度之一的邻苯二甲酸二己酯标准品或处理好的样品50μL到各自的酶标孔中，将免疫制备的邻苯二甲酸二己酯多克隆抗体以抗体稀释液：含0.1％明胶、含0.05％吐温-20、pH7.4、0.01M的磷酸盐缓冲溶液PBST，按1∶6000～1∶9000比例稀释后，加入酶标板中，每孔加50μL，37℃孵育1h后以PBST洗涤液洗涤3～5次；(3)加酶标二抗以抗体稀释液将辣根过氧化物酶标记的羊抗兔GAR-HRP以1∶3000～1∶5000进行稀释，每孔加100μL，37℃温育1h后以PBST洗涤液洗涤3～5次；(4)显色每孔加入显色液100μL，37℃显色15min；最后每孔加入终止液2M硫酸溶液100μL；用酶标仪450nm测吸光值A450，与所作标准曲线对比算出待测样品的邻苯二甲酸二己酯浓度。