[发明专利]一种利用单层培养技术制备和分离定型内胚层细胞的方法

摘要

本发明涉及一种利用单层培养技术制备和分离定型内胚层细胞的方法。本发明还公开了适用于制备定型内胚层细胞的培养基，所述培养基含有Neurobasal培养基、DMEM/F12培养基、N-2添加物、B-27添加物、牛血清白蛋白、单-二羟丙硫醇、活化素A。本发明的方法简单高效，可将哺乳动物(优选非人哺乳动物)胚胎干细胞向定型内胚层分化的效率大大提高。

主权项

一种制备含定型内胚层细胞的细胞群方法，其特征在于，所述方法包括：(1)培养容器中加入诱导分化培养基，所述的培养基包括：Neurobasal培养基 400-570ml/L；DMEM/F12培养基 400-570ml/L；N-2添加物 3-7ml/L；B-27添加物 5-15ml/L；牛血清白蛋白 0.34-0.64mg/L；单-二羟丙硫醇 0.09-0.225mM；活化素A 10-50mg/L；(2)将胚胎干细胞接种到(1)的培养基中，培养所述的胚胎干细胞3-10天，诱导胚胎干细胞分化，从而获得含定型内胚层细胞的细胞群，所述细胞群中定型内胚层细胞数量占细胞总数的40％以上。