[发明专利]一种构建酵母双价通用表达载体的方法无效
| 申请号： | 200810209569.3 | 申请日： | 2008-11-28 |
| 公开（公告）号： | CN101407823A | 公开（公告）日： | 2009-04-15 |
| 发明（设计）人： | 刘关君;刘桂丰;杨传平;刘明坤;阎秀峰;许志茹;魏志刚;王柏臣 | 申请（专利权）人： | 东北林业大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81 |
| 代理公司： | 哈尔滨市松花江专利商标事务所 | 代理人： | 荣 玲 |
| 地址： | 150040黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 一种构建酵母双价通用表达载体的方法，它涉及一种构建双价表达载体的方法。本发明解决了现有构建载体的方法不能构建出可以表达任意目的基因的通用载体的问题。本发明构建酵母双价通用表达载体的方法按照以下步骤进行：一、根据酵母表达载体pYES2序列分别设计引物，进行PCR扩增获得目的片段PGAL1和目的片段CYC1；二、得到质粒pMD18-PGAL1；三、获得质粒pMD18-PC；四、双酶切后回收目的片段和质粒pYES2并连接；获得酵母双价通用表达载体pYES2-PC。用本发明的方法构建出的通用双价载体能够准确表达连接的基因，只需要将目的基因片段直接连接在本发明构建的通用双价表达载体上就可以准确表达。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 构建 酵母 通用 表达 载体 方法 | ||
【主权项】：
1、一种构建酵母双价通用表达载体的方法，其特征在于构建酵母双价通用表达载体的方法按照以下步骤进行：一、根据酵母表达载体pYES2序列分别设计引物PGAL1-S、PGAL1-A、CYC1-S和CYC1-A，以质粒pYES2为模板、PGAL1-S和PGAL1-A为引物进行PCR扩增获得基因片段PGAL1，以质粒pYES2为模板、CYC1-S和CYC1-A为引物进行PCR扩增获得基因片段CYC1；二、将步骤一获得的基因片段PGAL1采用TA克隆方法连接到pMD18-T载体，得到质粒pMD18-PGAL1；三、将步骤一获得的基因片段CYC1和步骤二得到的质粒pMD18-PGAL1分别进行BamHI和XbaI双酶切后回收目的片段CYC1和质粒pMD18-PGAL1进行连接，获得质粒pMD18-PC；四、以步骤三得到的质粒pMD18-PC为模板、PGAL1-A和CYC1-S为引物进行PCR扩增，将扩增得到的目的片段和质粒pYES2分别用BamHI和EcoRI进行双酶切，双酶切后回收目的片段和质粒pYES2并连接；获得酵母双价通用表达载体pYES2-PC；其中步骤一中引物PGAL1-S 的序列为5′-ACGGATTAGAAGCCGCCGAGCGGGTGACAG-3′，引物PGAL1-A的序列为5′-CCGGAATTCGGTTTTTTCTCCTTGACGTTAA-3′，引物CYC 1-S的序列为5′-CGCGGATCCATCATGTAATTAGTTATGTCACG-3′，引物CYC 1-A的序列为5′-TGCTCTAGAAGCTTGCAAATTAAAGCCTTCG-3′。
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