[发明专利]一种高效基因克隆方法无效
| 申请号： | 200810231368.3 | 申请日： | 2008-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN101649315A | 公开（公告）日： | 2010-02-17 |
| 发明（设计）人： | 张建云;谷立坤;崔树军;卢敦华;廉有轩;金维平;吴烨;何晶亮;史丹;范玲 | 申请（专利权）人： | 河南工程学院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/31;C12N15/63 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 451191河南*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明提出一种用于克隆DNA片段的高效方法。以pUC18(pUC19)及其衍生质粒通过Sal I酶切后在5’添加C，T，G碱基，形成的T载体与经过3’加A的DNA片段连接，可有效地用来构建细菌基因组文库，病毒基因组文库，或用来筛选功能性基因。本方法简捷高效，可以用于实验室小规模使用，同时也可应用于生产基因克隆试剂盒。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高效 基因 克隆 方法 | ||
【主权项】：
1.基因克隆的高效方法，其特征在于选择pUC18(pUC19)质粒及其衍生质粒作为载体，采用Sal I酶切完全，产生5’端突出3个碱基的粘性末端5’ATGCCTGCAGG 3’3’TACGGACGTCCAGCT 5’载体完全酶切后用Klenow酶补加碱基T、C、G，使载体片段末端5’端突出碱基T5’ATGCCTGCAGGTCG 3’3’TACGGACGTCCAGCT 5’细菌基因组DNA采用限制性内切酶酶切或超声波酶切方法，断裂成DNA片段长度小于10kb的片段。细菌基因组DNA片段，PCR产物用Taq酶补平并在3’端加碱基A。恰好与用上述方法修饰过的载体与通过A-T碱基末端互补而连接起来，经过转化大肠杆菌后蓝白斑互补筛选克隆基因。
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