[发明专利]一种双酚A的酶联免疫检测方法

摘要

一种双酚A的酶联免疫检测方法，属于免疫检测技术领域。本发明利用合成的双酚A免疫原免疫得到多克隆抗体，以双酚A为标准品，以双酚酸半抗原与OVA的偶联物作为包被抗原，建立双酚A的间接竞争酶联免疫检测方法。本发明建立了双酚A的间接竞争ELISA方法，为双酚A的残留检测提供了一种快速高效的检测方法，由于采用的是多克隆抗体，费用较低且稳定性和重复性好。灵敏度为0.1ng/ml，线性范围为0～100ng/ml。免疫反应的高特异性和亲和性使ELISA具有极高的选择性和灵敏度。

主权项

1、一种双酚A的酶联免疫检测方法，其特征在于利用合成的双酚A免疫原免疫得到多克隆抗体，以双酚A为标准品，以双酚酸半抗原与OVA的偶联物作为包被抗原，建立双酚A的间接竞争酶联免疫检测方法；步骤如下：(1)以0. 05M的碳酸盐缓冲溶液稀释包被抗原1∶5000～1∶8000，加入酶标板中，每孔100μL，4℃孵育过夜，然后用含0.1％明胶的上述碳酸盐缓冲液作为封闭液，封闭2h；(2)将系列浓度梯度的双酚A标准品、及处理好的样品，分别加入到各自的酶标孔中，每孔50μL；将多克隆抗体以抗体稀释液以1∶6000～1∶9000的比例稀释，然后每孔加入50μL稀释后的多克隆抗体；37℃温育1h后以PBST洗涤液洗涤3～5次；(3)将辣根过氧化物酶标记的羊抗兔GAR-HRP用抗体稀释液以1∶3000～1∶5000进行稀释，然后每孔加入100μL，37℃作用1h后以PBST洗涤液洗涤3～5次；(4)每孔加入显色液100μL，37℃显色15min；加入终止液2M硫酸溶液，每孔100μL；酶标仪450nm测吸光值OD，与所作标准曲线对比算出待测样品的双酚A含量。